口蹄疫（FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的牛、羊、猪等偶蹄动物发生的一种急性、热性、高度接触性传染病。感染动物后，引起动物口腔黏膜、蹄部及乳房的皮肤出现水疱、溃烂等现象，感染动物100%发病，使实际的畜产量锐减，因为传播效力极高，可引起世界范围内FMD大流行，一经发现，很多发达国家将动物进行捕杀、深埋处理。鉴于其危害之大，影响范围之广，被国际兽医局（OIE）列为“Ａ类烈性传染病”之首。目前对FMD行之有效的预防措施是进行灭活疫苗注射，但是在大规模生产灭活疫苗过程中有可能导致活FMDV逃逸，造成FMD的大规模流行，同时疫苗的使用为FMD流行病学调查增加了难度。所以制备亚单位疫苗是解决这些问题的一种重要途径，然而由于一般的亚单位疫苗不能包含所有的抗原决定簇，其免疫原性较差。而FMDV空衣壳上表达有所有的抗原位点，且不含病毒的遗传物质，当核衣壳进入动物体内时，能引起体液免疫和细胞免疫，具有高的免疫原性，且不会在动物体内复制增殖，不会引起动物发病。本研究旨在应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，在昆虫细胞中表达FMDV空衣壳，作为一种新型FMD候选亚单位疫苗。FMDV为单股正链RNA病毒，基因组全长约为8.5kb，衣壳蛋白由P1基因编码，包括VP4、VP2、VP3、VP1四种蛋白。本研究将已有FMDV基因的载体序列与GenBank中的DQ989304.1FMDV基因全长序列比对，确定已有FMDV基因中的结构基因序列信息，结构蛋白基因长度分别为：255bp、654bp、657bp、624bp，氨基酸为：85aa、218aa、219aa、208aa。2A基因全长为54bp，编码18aa，3C蛋白酶基因全长639bp，编码213aa。本研究将P1结构基因，2A、3C及部分2B、3B非结构基因串联，插入pFastBac1载体中，成功构建了重组Donor载体，与杆状病毒质粒Bacmid间发生位点特异性重组后，得到含有FMDV P12A3C基因的重组杆状病毒载体rBacmid。应用脂质体转染法转染Sf9昆虫细胞系，从细胞形态学，DNA、mRNA、蛋白质分子水平及FMDV空衣壳形态学等方面，验证了P12A3C基因能在昆虫细胞中有效表达及所表达的蛋白能够自我剪切和组装成为不含遗传物质的FMDV空衣壳（VLPs）。通过大量培养Sf9细胞并接毒，得到足够的FMDV空衣壳蛋白，选择豚鼠为实验动物分组，按照免疫方案，进行3次免疫注射，应用心脏采血法获得4批豚鼠血清，对其进行间接ELISA试验，测定其实验组血清中的抗体效价，发现所获得的FMDV的VLPs可以刺激豚鼠产生与较高滴度的抗体。本研究为FMDV空衣壳疫苗的研发奠定了一定的基础。