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目的:该实验采用改良的Allen重物打击法制造大鼠脊髓损伤模型,观察中药女贞子液对大鼠脊髓损伤后的保护作用和相关机制,为女贞子的临床应用提供实验依据。
方法:选用90只SD大鼠,雄性,体重230~270g。将大鼠分为假手术组、损伤组和治疗组。假手术组只取出椎板不撞击脊髓,损伤组和治疗组采用改良的Allen重物打击法撞击脊髓造成损伤。治疗组取用女贞子药液(3.0g/Kg·d)腹腔注射,假手术组与损伤组选用与治疗组相同剂量的生理盐水腹腔注射。于 1h、6h、24h、3d时检测大鼠血清 IL-1β含量的变化;并于造模成功后 6个时间点:1h、6h、24h、3d、6d、14d取出脊髓标本实施脊髓病理形态学观察;通过免疫组织化学法检测脊髓组织中 Bcl-2的表达,其阳性表达率采用光密度值(OD值)表示。
结果:(1)使用中药女贞子治疗后,大体标本及HE染色观察显示脊髓的继发性损伤有所减轻。(2)血清IL-1β含量显示:大鼠脊髓损伤后1h血清IL-1β表达迅速上调并于24h达高峰,之后明显降低;术后6h损伤组、治疗组血清IL-1β含量与空白组比较出现显著性差异(P<0.05);术后1h、6h,损伤组与治疗组同时间点两两比较无显著性差异(P>0.05);术后24h后,损伤组与治疗组比较,有显著性差异(P<0.05)。(3)Bcl-2免疫组化结果显示:假手术组脊髓组织中Bcl-2仅有少量表达;损伤组1h既有少量的Bcl-2表达,6h后增多,3d脊髓组织中Bcl-2表达达高峰并维持至损伤后6d,Bcl-2表达主要在脊髓灰质的神经细胞胞浆及少量的胶质细胞中;女贞子治疗组在所有时间点Bcl-2的表达较损伤组明显增强,差异有统计学意义(P<0.05),且表达高峰提前至24h,同时脊髓白质神经纤维网也有少量的Bcl-2表达。
结论:(1)改良的Allen重物打击法制造大鼠SCI重复性强,可定量分级,便于操作。(2)女贞子能改善大鼠SCI后组织病理学改变,能减轻脊髓继发性损伤,对受损神经有明显保护作用。( 3)女贞子能有效抑制大鼠SCI后IL-1β的表达,减轻损伤区炎症反应和细胞凋亡。(4)女贞子能有效增强 SCI组织Bcl-2的表达,扩大表达范围,使表达高峰提前,并有效抑制神经细胞凋亡,提示女贞子保护大鼠SCI的作用机理之一可能是其诱导受损脊髓组织表达 Bcl-2。