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第一部分: 雷公藤红素对老年小鼠肝叶部分切除术后空间记忆能力改变的影响
目的: 动态观察雷公藤红素对老年小鼠肝叶部分切除术后空间记忆能力改变的影响。
方法: 144只C57BL/6老年小鼠随机分为3组:假手术组 (S组,n =48)、手术组 (O组,n =48)和手术加雷公藤红素组(C组,n =48),各组再分为12 h、1 d、3 d和7 d亚组, 每组12只。S组仅麻醉后在腹部相同部位做切开缝合术,O组行肝叶部分切除术,C组在手术组的基础上,分别在术前三天开始(每日一次)、手术结束时及术后每天予以雷公藤红素60ug.kg-1.d-1腹腔注射,S组和O组注射同等容积的10%二甲亚砜作为溶剂对照。每组小鼠手术前Morris 水迷宫训练5 d,每天4次,休息1 d后手术,术后用Morris 水迷宫法观察1 d、3 d、7 d小鼠空间记忆能力的改变。学习记忆测试后,各亚组12只小鼠中有6只直接取海马,行western blot监测;另外6只小鼠用作灌注、取材,行免疫组织化学监测,进行试验的第二部分。
结果: O组中3 d和7 d组分别与S组的3 d和7 d相比,小鼠找到平台的潜伏期和游泳路径都延长,跨越原平台数减少,差异有统计学意义( P < 0.05或0.01 );与术前比较,小鼠的水迷宫成绩也下降,差异也有统计学意义( P < 0.05或0.01 );C组中3 d和7 d与O组同时点比较,找到平台的潜伏期明显缩短,穿过原平台位置的次数明显增多( P < 0.05或0.01 ) ;但是,C组与S组比较,则差异无统计学意义( P>0.05 )。
结论: 肝叶部分切除后,老年小鼠的空间记忆能力下降,雷公藤红素对肝叶部分切除小鼠的术后记忆损害具有明显保护作用。
第二部分: 雷公藤红素对老年小鼠肝叶部分切除术后海马磷酸化tau蛋白Ser404、Ser199/202和总tau蛋白表达的影响
目的: 观察雷公藤红素对老年小鼠肝叶部分切除术后海马磷酸化tau 蛋白Ser404、Ser199/202和总tau(tau-46)蛋白表达的影响。
方法: 上述各亚组12只小鼠行为学测试结束,其中6只小鼠麻醉后,冰上取海马,-80℃保存,另外6只小鼠用作心脏灌注固定脑组织、取材,分别行western-blot和免疫组织化学测定相应蛋白的表达。
结果: Western-blot显示O组磷酸化tau 蛋白Ser404、Ser199/202表达高于S组( P < 0.01 ),其中Ser404于12 h开始增高,3 d达高峰( P < 0.01 ),7 d时基本正常(P > 0.05);Ser199/202位点的表达水平则于12 h增高,24 h达高峰,此后略有下降,7 d时仍高于正常( P < 0.01 );Tau蛋白总量均较假手术组的同时点增加( P < 0.01 ) 。但C组与S组比较差异无统计学意义(P>0.05);与手术组的同时点比较,P-tau Ser404、Ser199/202和tau蛋白总量表达减少,差异有统计学意义(p<0.01)。免疫组织化学染色的结果与western-blot表达的结果一致。
结论: 老年小鼠肝叶部分切除术后,海马磷酸化tau蛋白和总tau蛋白表达增加,雷公藤红素可抑制磷酸化tau蛋白和总tau蛋白的表达。