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目的:肺纤维化(Pulmonary fibrosis,PF)是多种病因引起肺损伤的共同结局,是一种慢性间质性肺疾病,主要病理变化是细胞外基质堆集和特征性的肌成纤维细胞(Myofibroblasts,MF)灶存在。α-平滑肌肌动蛋白(Alpha smooth muscle actin,α-SMA)是肌成纤维细胞的特征性标志物,可作为判断肺纤维化的程度和组织修复的重要指标之一。结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)属于即刻早期基因、高度保守的CCN多肽家族。CTGF是多种促纤维化因子的共同下游因子,在介导肺纤维化发生的作用机制中发挥重要作用。研究发现,在博莱霉素(Bleomycin,BLM)诱导的大鼠肺纤维化形成过程中,α-SMA和CTGF的表达均增强,AG和Bai对肺纤维化有防治作用。本实验旨在观察氨基胍和黄芩苷对BLM诱导的大鼠肺纤维化肺内CTGF和α-SMA表达的影响,并对这两种药的效果进行比较,为阐明氨基胍和黄芩苷防治肺纤维化的机制提供实验资料。
方法:免疫组化方法检测CTGF和α-SMA的表达。
取24只健康清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠(雄性,体重160-180 g)随机分成4组:
1.对照组:14NS+14NS组(n=6):经大鼠气管内一次性滴注生理盐水(0.5ml/kg)后,腹腔注射NS(1 mg.kg-1.day-1),连续14天。
2.模型组:14dM+14dNS组(n=6):经大鼠气管内一次性滴注BLM(5mg/kg)后,腹腔注射NS(1 mg.kg-1.day-1),连续14天。
3.Bai治疗组:14dM+14dBai组(n=6):经大鼠气管内一次性滴注BLM(5mg/kg)后,腹腔注射黄芩苷(12.5 mg.kg-1.day-1),连续14天。
4.AG治疗组:14dM+14dAG组(n=6):经大鼠气管内一次性滴注BLM(5 mg/kg)后,腹腔注射AG(20 mg.kg-1.day-1),连续14天。
以上各组大鼠均在气管注药后第15天处死取肺,肺组织用于检测α-SMA及CTGF免疫阳性表达。所有数据均采取均数±标准差((x)+SD)表示,使用SPSS13.0统计软件,多个样本均数比较用单因素方差分析(One-way ANOVA),多个样本均数间的两两比较用最小显著差法(Leastsignificant difference,LSD),以P<0.05为有显著性差异。
结果:
1.大鼠肺内CTGF免疫组化结果免疫组化结果显示:CTGF为胞浆分布,14NS+14NS组大鼠的支气管上皮细胞内有CTGF少量表达。14dM+14NS组大鼠肺内CTGF的表达明显增多,分布在支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、巨噬细胞、成纤维细胞内。
与14NS+14NS组比较,14dM+14NS组CTGF免疫阳性的光密度值明显增高(P<0.01)。与14dM+14dNS组比较,14dM+14dBai组和14dM+14dAG组CTGF免疫阳性的光密度值均明显降低(P<0.01),但仍高于14NS+14NS组(P<0.01)。14dM+14dBai组和14dM+14dAG组CTGF免疫阳性的光密度值无显著性差异(P>0.05)。
2.大鼠肺内α-SMA免疫组化结果免疫组化结果显示:α-SMA为胞浆分布,14NS+14NS组大鼠仅在肺组织的大血管和支气管平滑肌细胞内有α-SMA表达。14dM+14NS组大鼠肺内α-SMA免疫阳性染色数量明显增高,主要分布在大血管和支气管周围肺间质的肌成纤维细胞内。
与14NS+14NS组比较,14dM+14NS组α-SMA免疫阳性的光密度值显著增高(P<0.01)。与14dM+14NS组比较,14dM+14dBai组和14dM+14dAG组α-SMA免疫阳性的光密度值均明显降低(P<0.01),但仍高于14NS+14NS组(P<0.05)。14dM+14dBai组和14dM+14dAG组α-SMA免疫阳性的光密度值显著性差异(P>0.05)。
结论:
1.氨基胍和黄芩苷抑制BLM诱导的大鼠肺纤维化肺内CTGF的表达和成纤维细胞向肌成纤维细胞转化。
2.氨基胍和黄芩苷对BLM诱导的大鼠肺纤维化肺内CTGF和α-SMA表达的影响没有差异性。