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研究背景神经病理性疼痛的治疗是一项世界性难题。传统的药物治疗仅能缓解部分症状,且长期使用可能出现严重的副作用。有关神经病理性疼痛机制的研究对于新的治疗方案的提出有重要意义。表观遗传调控在神经病理性疼痛中的作用越来越明显。组蛋白的修饰作为表观遗传学的重要组成部分,参与神经病理性疼痛的调控。研究发现组蛋白甲基转移酶G9a通过调控μ阿片受体(Mu opioid receptor,MOR)和钾离子通道Kv1.2在神经病理性疼痛中发挥关键作用。转录因子CCAAT/enhancer binding protein(C/EBP)β可以激活G9a基因表达参与脂质的形成。但在神经系统中C/EBPβ是否参与G9a的调控以及C/EBPβ在神经病理性疼痛中具体作用,目前还不清楚。研究目的探讨C/EBPβ是否参与神经病理性疼痛的调控及其作用机制。研究方法1.通过坐骨神经慢性压迫性损伤(Chronic construction injury,CCI)手术制作神经病理性疼痛的动物模型,观察神经病理性疼痛中C/EBPβ表达情况。2.通过si RNA基因沉默和脊髓背根神经节(Dorsal root ganglia,DRG)显微注射方法下调C/EBPβ的表达,观察动物机械缩足阈值、热缩足潜伏期、冷缩足潜伏期以及运动功能的变化。3.通过AAV载体和DRG显微注射技术上调C/EBPβ的表达,观察动物机械缩足阈值、热缩足潜伏期、冷缩足潜伏期和运动功能的变化以及是否产生条件位置偏爱现象。4.利用RT-PCR和Western Blot方法,检测抑制或过表达C/EBPβ后DRG内G9a、MOR和Kv1.2的m RNA和蛋白含量的变化;通过免疫组织化学和单细胞RT-PCR技术检测C/EBPβ与G9a、MOR和Kv1.2的共表达情况;通过染色质免疫共沉淀技术检验DRG内C/EBPβ与G9a的直接作用;采用基因敲除、细胞培养等技术探讨G9a在C/EBPβ调控通路中的作用。结果1.CCI引起外周神经损伤后,受损DRG内C/EBPβ的表达在术后3天即升高,一直持续至术后14天。2.DRG内预先注射C/EBPβsi RNA能够阻止CCI诱导动物产生神经病理性疼痛的症状。CCI术后采用si RNA的方法降低C/EBPβ的表达能够缓解动物神经损伤引起的痛敏症状。3.DRG内升高C/EBPβ的表达能够诱导动物产生对机械刺激和温度刺激的痛觉过敏以及自发性疼痛的症状。4.无论si RNA基因沉默、AAV载体过表达还是DRG显微注射技术均不影响动物的运动功能。5.CCI能够引起受损DRG内C/EBPβ和G9a的蛋白与m RNA含量升高,MOR和Kv1.2的蛋白与m RNA水平下降。抑制C/EBPβ的表达能够下调CCI引起的G9a的高表达同时升高MOR和Kv1.2的表达。模拟神经病理性疼痛中DRG内C/EBPβ的高表达能够上调DRG内G9a的表达并降低MOR和Kv1.2的蛋白和m RNA水平。6.神经损伤能够促使受损DRG内C/EBPβ与G9a基因的结合增加。而且C/EBPβ能够与G9a、MOR及Kv1.2共表达于DRG细胞中。7.DRG内基因敲除G9a可以阻止C/EBPβ对MOR和Kv1.2的调控作用。结论DRG内C/EBPβ通过调控G9a及下游分子MOR和Kv1.2的表达参与神经病理性疼痛的产生和发展。