目前癌症已成为中国人口死亡的最主要原因之一,对人类健康构成严重威胁。胰腺癌作为恶性程度最高的肿瘤之一,具有临床表现隐匿、预后差和死亡率高的特点。由于胰腺癌具有高度增殖性和化学耐药性且早期诊断困难,大部分患者确诊时已丧失手术机会,目前的治疗选择(如放疗和化疗)对改善患者生存率和生活质量几乎无济于事,因此迫切需要探究新型生物标志物和有效的治疗靶点。酪氨酸激酶受体RON(巨噬细胞刺激1受体[MST1R])和MET(肝细胞生长因子受体[HGFR])均属于MET原癌基因家族,在许多癌症中存在异常的表达和激活。本研究通过免疫组织化学染色法分析了人胰腺癌组织样本中RON和MET的表达水平,并且选择四种胰腺癌细胞系和四种MET超家族小分子抑制剂,分别通过细胞增殖毒性实验、划痕实验和Caspase-Glo 3/7实验来探究四种酪氨酸激酶抑制剂抑制RON和/或MET信号通路后对细胞活力,迁移和凋亡的影响。通过免疫沉淀和蛋白免疫印迹实验来分析细胞内信号转导途径及其信号分子。通过构建小鼠异种移植瘤模型,进一步研究四种酪氨酸激酶抑制剂在体内的靶向治疗效果。在本研究中,我们发现胰腺癌组织中广泛存在RON和MET的异常共表达,且表达水平与患者生存时间显著相关。共同过表达RON和MET的患者生存时间最短。共同靶向RON和MET信号通路的酪氨酸酶抑制剂可以有效的抑制胰腺癌细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,并且在体内实验中抑制肿瘤的生长。第一部分 RON和MET在胰腺癌中的表达水平及其与临床病理特征和总体生存时间的关系目的:酪氨酸激酶受体RON和MET在许多癌症中存在异常的表达和激活,但RON和MET在胰腺癌中的共表达特征及其与患者生存时间的关系仍值得进一步探究。在本研究中,我们探究了 RON和MET在胰腺癌中的表达情况及其与临床病理特征和生存时间的关系。材料和方法:我们纳入了 227例胰腺癌患者,并收集其性别,年龄,肿瘤大小,分期,有无淋巴结转移,有无远处转移及患者生存时间等临床资料,并通过免疫组织化学染色法分析RON和MET的表达水平。采用卡方检验分析RON和MET的表达水平与临床病理特征之间的关系,采用log-rank检验,Kaplan-Meier单因素生存分析及COX多因素分析,明确RON和MET对患者预后的预测作用。结果:在胰腺癌组织中RON和MET的异常表达广泛存在,且RON表达水平与肿瘤远处转移密切相关(P=0.019)。227例胰腺癌样本中,195例(85.9%)样本RON表达阳性,其中75例(33%)RON过表达;207例(91.2%)样本MET表达阳性,其中93例(41%)MET过表达;182例(80%)样本RON和MET共表达,其中35例样本RON和MET共同过表达,约占RON过表达样本的50%。RON和MET的表达水平高度相关,而且RON和MET表达水平与患者生存时间也显著相关,共同过表达的患者平均生存时间最短。结论:RON是远处转移的独立预测因子,RON和MET表达水平与患者生存时间显著相关,共同过表达的RON和MET可以作为判断胰腺癌预后的重要指标。第二部分 胰腺癌中靶向RON和/或MET的酪氨酸激酶受体抑制剂的体内外抑癌效果目的:在许多癌症中,RON和MET的异常表达和激活促进癌细胞增殖、侵袭、转移和耐药等。在本研究中,我们探究了胰腺癌中RON和MET之间是否存在交叉对话及其信号转导机制,并分析过表达的RON和/或MET作为抗胰腺癌药物治疗靶点的意义。材料和方法:采用了四种表达不同水平的RON和/或MET的人胰腺癌细胞系(BxPC3,AsPC1,L3.6p1,Panc1)和四种 MET 超家族抑制剂(BMS-777607,PHA665752,INCB28060,Tivantinib)。通过细胞增殖毒性实验,划痕实验和Caspase-Glo 3/7实验来探究四种酪氨酸激酶抑制剂对细胞活力,细胞迁移和凋亡的影响。通过免疫沉淀和蛋白质免疫印迹实验来分析胰腺癌细胞内信号分子和信号转导途径的改变。通过构建小鼠异种移植瘤模型探究四种酪氨酸激酶抑制剂的体内抗癌作用。结果:BMS-777607和PHA665752可以通过共同抑制RON和MET的磷酸化及其介导的信号通路来抑制胰腺癌细胞活力和迁移,并促进细胞凋亡。在体内实验中,它们可显著抑制肿瘤组织内磷酸化RON和磷酸化MET的表达并进一步抑制肿瘤的生长。而作为单独抑制MET的小分子抑制剂,INCB28060在体内和体外实验中均没有显著的抑癌效果。结论:RON和MET共表达及其交叉对话促进胰腺癌细胞的恶性生物行为,联合抑制异常表达的RON和MET可能是胰腺癌治疗的一种潜在有效的策略。