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【目的】
通过检测孕期急性小鼠巨细胞病毒（MCMV）感染孕鼠的胎盘组织的模式识别受体TLR2和TLR4转录水平及5-HT合成酶TPH1和DDC蛋白表达变化，与孕前 MCMV 感染和孕期不同剂量细菌脂多糖（LPS）处理孕鼠进行比较；进一步观察孕期急性MCMV感染和大剂量LPS处理孕鼠胎盘内TPH1和DDC分布特征以及其胎鼠前脑 5-HT 能神经轴突密度的变化，以明确孕鼠急性巨细胞病毒感染对胎盘 TLR2/4表达的影响，并探索其与胎盘和胎脑 5-羟色胺系统改变的相关性。
【方法】
1．动物实验分组与建模：
1) 分组：共分6组，孕期急性MCMV感染组（a-MCMV）；孕期LPS处理组（依剂量分为3个亚组：高剂量组：LPS50μg/kg；中剂量组：LPS 25μg/kg和低剂量组：LPS 1.5μg/kg）；孕前MCMV感染组（p-MCMV）以及正常组（Normal）。
2)p-MCMV组建模：6.5周龄雌性BALB/c小鼠腹腔内接种MCMV Smith毒株（5×103 PFU/只，液体量200μl/只），饲养1个月后受孕，于受孕后胚胎第12.5天（E12.5）时腹腔注射PBS缓冲液（液体量50μl/只）；
3) a-MCMV组建模：6.5周龄雌性BALB/c小鼠腹腔注射PBS缓冲液（液体量200μl/只），饲养1个月后受孕，于受孕后胚胎第7.5天（E7.5）时腹腔接种MCMV毒株（5×103 PFU/只，液体量50μl/只）；
4) LPS处理组建模：6.5周龄雌性BALB/c小鼠腹腔注射PBS缓冲液（液体量200μl/只），饲养1个月后受孕，于受孕后胚胎第12.5天（E12.5）时腹腔注射LPS溶液，高、中、低三个剂量组分别注射LPS 50μg/kg、25μg/kg和1.5μg/kg（液体量50μl/只）；
5) 正常对照组：6.5周龄雌性BALB/c小鼠腹腔注射PBS缓冲液（液体量200μl/只），饲养1个月后受孕，于受孕后胚胎第12.5天（E12.5）时腹腔注射PBS缓冲液（液体量50μl/只）；
2．样本收集和样本例数：分别在E13.5和E14.5（孕中期）及E18.5（孕晚期）三个时间点收集各组孕鼠胎盘和胎脑标本，每个时间点每组至少4只孕鼠；每只孕鼠至少收集到3个完整胎盘（分别用于石蜡包埋，RNA提取和蛋白提取）和1个完整胎脑（用于石蜡包埋）；
3．实时荧光定量 PCR（Real-Time RT-PCR）法检测各组胎盘组织中 TLR2 和TLR4的mRNA转录水平；
4．蛋白印迹（Western Blot）法检测各组胎盘组织中5-羟色胺合成酶——多巴胺脱羧酶（DDC）和色氨酸羟化酶1（TPH1）的蛋白表达水平；
5．免疫组化法检测a-MCMV组和高剂量LPS处理组胎盘组织中5-羟色胺合成酶——多巴胺脱羧酶（DDC）和色氨酸羟化酶1（TPH1）的组织分布特点；
6．免疫组化法检测 a-MCMV组和高剂量处理组胎儿前脑中5-羟色胺能神经轴突的密度差异。
【结果】
1. 胎盘TLR2和TLR4 mRNA转录水平：与正常组比较，a-MCMV组E13.5时胎盘 TLR2 和 TLR4 mRNA 表达水平明显升高（p＜0.05），随后胎盘 TLR2和TLR4 mRNA表达水平恢复正常；而p-MCMV组只在孕晚期E18.5时胎盘TLR2 mRNA表达水平明显上调（p＜0.05）；LPS处理组在E13.5时胎盘TLR2和TLR4 mRNA表达水平略有下降，随后于E14.5又有所回升，但差异无统计学意义；
2. 胎盘DDC和TPH1蛋白表达水平：相对于正常组来说，高剂量LPS处理组在整个观察期内胎盘DDC蛋白表达水平呈升高趋势，但只在E13.5和E18.5时差异有统计学意义（p＜0.05）；a-MCMV组同样也在整个观察期内胎盘DDC蛋白表达水平呈现上升趋势，但只在孕中期（即E13.5和E14.5）差异有统计学意义（p＜0.05）；p-MCMV 组胎盘 DDC 蛋白表达水平无明显变化。与正常组比较，高剂量LPS处理组胎盘TPH1蛋白表达水平在整个观察期内呈升高趋势，但差异仅在 E18.5时具有统计学意义（p＜0.05）；a-MCMV 组胎盘TPH1蛋白表达水平同样也在整个观察期内呈现上升趋势，但差异仅在E13.5时具有统计学意义（p＜0.05）；p-MCMV 组胎盘 TPH1 蛋白表达虽在 E13.5和E14.5时有上升的趋势，但差异无统计学意义；
3. 胎盘DDC和TPH1的分布：a-MCMV组及高剂量LPS组在E13.5时胎盘迷路区（以血管内皮细胞为甚）DDC表达（胞质及胞膜）均明显上调；同时， a-MCMV组在E13.5 时胎盘迷路区（滋养细胞为主）TPH1表达（胞质）亦有明显上调，而高剂量LPS组E13.5时胎盘迷路区TPH1的表达上调，但低于a-MCMV组；
4. 胎脑5-羟色胺能神经轴突的密度：a-MCMV 组在孕中期（E13.5）时胎鼠前脑5-羟色胺能神经轴突的密度明显减低，提示其生长受到明显抑制；高剂量LPS组胎鼠前脑有类似表现，但抑制程度稍弱于a-MCMV组。
【结论】
孕期急性MCMV感染可使孕中期胎盘5-HT合成系统明显活化，并抑制孕中期胎鼠前脑 5-羟色胺能神经轴突的发生和生长，其机制可能与激活胎盘TLR2/TLR4途径及后续免疫炎症反应相关。
通过检测孕期急性小鼠巨细胞病毒（MCMV）感染孕鼠的胎盘组织的模式识别受体TLR2和TLR4转录水平及5-HT合成酶TPH1和DDC蛋白表达变化，与孕前 MCMV 感染和孕期不同剂量细菌脂多糖（LPS）处理孕鼠进行比较；进一步观察孕期急性MCMV感染和大剂量LPS处理孕鼠胎盘内TPH1和DDC分布特征以及其胎鼠前脑 5-HT 能神经轴突密度的变化，以明确孕鼠急性巨细胞病毒感染对胎盘 TLR2/4表达的影响，并探索其与胎盘和胎脑 5-羟色胺系统改变的相关性。
【方法】
1．动物实验分组与建模：
1) 分组：共分6组，孕期急性MCMV感染组（a-MCMV）；孕期LPS处理组（依剂量分为3个亚组：高剂量组：LPS50μg/kg；中剂量组：LPS 25μg/kg和低剂量组：LPS 1.5μg/kg）；孕前MCMV感染组（p-MCMV）以及正常组（Normal）。
2)p-MCMV组建模：6.5周龄雌性BALB/c小鼠腹腔内接种MCMV Smith毒株（5×103 PFU/只，液体量200μl/只），饲养1个月后受孕，于受孕后胚胎第12.5天（E12.5）时腹腔注射PBS缓冲液（液体量50μl/只）；
3) a-MCMV组建模：6.5周龄雌性BALB/c小鼠腹腔注射PBS缓冲液（液体量200μl/只），饲养1个月后受孕，于受孕后胚胎第7.5天（E7.5）时腹腔接种MCMV毒株（5×103 PFU/只，液体量50μl/只）；
4) LPS处理组建模：6.5周龄雌性BALB/c小鼠腹腔注射PBS缓冲液（液体量200μl/只），饲养1个月后受孕，于受孕后胚胎第12.5天（E12.5）时腹腔注射LPS溶液，高、中、低三个剂量组分别注射LPS 50μg/kg、25μg/kg和1.5μg/kg（液体量50μl/只）；
5) 正常对照组：6.5周龄雌性BALB/c小鼠腹腔注射PBS缓冲液（液体量200μl/只），饲养1个月后受孕，于受孕后胚胎第12.5天（E12.5）时腹腔注射PBS缓冲液（液体量50μl/只）；
2．样本收集和样本例数：分别在E13.5和E14.5（孕中期）及E18.5（孕晚期）三个时间点收集各组孕鼠胎盘和胎脑标本，每个时间点每组至少4只孕鼠；每只孕鼠至少收集到3个完整胎盘（分别用于石蜡包埋，RNA提取和蛋白提取）和1个完整胎脑（用于石蜡包埋）；
3．实时荧光定量 PCR（Real-Time RT-PCR）法检测各组胎盘组织中 TLR2 和TLR4的mRNA转录水平；
4．蛋白印迹（Western Blot）法检测各组胎盘组织中5-羟色胺合成酶——多巴胺脱羧酶（DDC）和色氨酸羟化酶1（TPH1）的蛋白表达水平；
5．免疫组化法检测a-MCMV组和高剂量LPS处理组胎盘组织中5-羟色胺合成酶——多巴胺脱羧酶（DDC）和色氨酸羟化酶1（TPH1）的组织分布特点；
6．免疫组化法检测 a-MCMV组和高剂量处理组胎儿前脑中5-羟色胺能神经轴突的密度差异。
【结果】
1. 胎盘TLR2和TLR4 mRNA转录水平：与正常组比较，a-MCMV组E13.5时胎盘 TLR2 和 TLR4 mRNA 表达水平明显升高（p＜0.05），随后胎盘 TLR2和TLR4 mRNA表达水平恢复正常；而p-MCMV组只在孕晚期E18.5时胎盘TLR2 mRNA表达水平明显上调（p＜0.05）；LPS处理组在E13.5时胎盘TLR2和TLR4 mRNA表达水平略有下降，随后于E14.5又有所回升，但差异无统计学意义；
2. 胎盘DDC和TPH1蛋白表达水平：相对于正常组来说，高剂量LPS处理组在整个观察期内胎盘DDC蛋白表达水平呈升高趋势，但只在E13.5和E18.5时差异有统计学意义（p＜0.05）；a-MCMV组同样也在整个观察期内胎盘DDC蛋白表达水平呈现上升趋势，但只在孕中期（即E13.5和E14.5）差异有统计学意义（p＜0.05）；p-MCMV 组胎盘 DDC 蛋白表达水平无明显变化。与正常组比较，高剂量LPS处理组胎盘TPH1蛋白表达水平在整个观察期内呈升高趋势，但差异仅在 E18.5时具有统计学意义（p＜0.05）；a-MCMV 组胎盘TPH1蛋白表达水平同样也在整个观察期内呈现上升趋势，但差异仅在E13.5时具有统计学意义（p＜0.05）；p-MCMV 组胎盘 TPH1 蛋白表达虽在 E13.5和E14.5时有上升的趋势，但差异无统计学意义；
3. 胎盘DDC和TPH1的分布：a-MCMV组及高剂量LPS组在E13.5时胎盘迷路区（以血管内皮细胞为甚）DDC表达（胞质及胞膜）均明显上调；同时， a-MCMV组在E13.5 时胎盘迷路区（滋养细胞为主）TPH1表达（胞质）亦有明显上调，而高剂量LPS组E13.5时胎盘迷路区TPH1的表达上调，但低于a-MCMV组；
4. 胎脑5-羟色胺能神经轴突的密度：a-MCMV 组在孕中期（E13.5）时胎鼠前脑5-羟色胺能神经轴突的密度明显减低，提示其生长受到明显抑制；高剂量LPS组胎鼠前脑有类似表现，但抑制程度稍弱于a-MCMV组。
【结论】
孕期急性MCMV感染可使孕中期胎盘5-HT合成系统明显活化，并抑制孕中期胎鼠前脑 5-羟色胺能神经轴突的发生和生长，其机制可能与激活胎盘TLR2/TLR4途径及后续免疫炎症反应相关。