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有机磷和氨基甲酸酯类农药是最常见的两类农药,也是目前为止仍然最广泛使用的农药,它们是一种神经毒物,会抑制人及动物体内乙酰胆碱酯酶活性,引起中枢神经系统功能紊乱,出现中毒症状,以至危及生命。近年来,农药残留问题越来越多的受到人们的关注。虽然政府明令禁止将有机磷和氨基甲酸酯类农药中的高毒、剧毒品种用于蔬菜果品的生产,但是不少地方仍在使用这些国家明确规定在蔬菜上禁用的高毒剧毒农药,因食用含大量农残的蔬菜所引起的人畜中毒事件时有发生,带来了严重的食品安全问题。 气相色谱及高效液相色谱技术检测农药残留具有很高的准确性和灵敏性,但是它们需要昂贵的仪器设备、专门的操作人员以及严格的操作环境,检测周期也比较长,不适合于市场和田间的现场快速检测。传统的快速检测方法因为敏感生物元件酶的保存条件较为苛刻,检测又受提取液颜色的影响,给应用上带来诸多不便。因此,急需研究一些快速、灵敏、便捷的检测方法,将高残留的农产品阻挡在交易市场之外,以杜绝食品安全事故的发生。 本研究的目的是针对我国农产品小规模、分散式的产销特点,寻找一种简便、快速、灵敏、可靠、实用的市场果品蔬菜中常见农药残留的快速检测方法。研究内容及结果如下: (1)对乙酰胆碱酯酶的测活方法进行优化,并对影响测活的因素进行了研究,改进了乙酰胆碱酯酶的测活体系和有关参数,即:AChE酶液50μL(1个固定化酶片),底物碘化硫代乙酰胆碱50μL,显色剂双二硝基苯甲酸50μL,pH8.0缓冲液2.9mL(固定化酶测活时加入3.95mL),终止剂1%SDS1mL(固定化酶测活时不用)。 (2)通过对5种固定化材料的研究,筛选出固定乙酰胆碱酯酶的合适材料为硝酸纤维素膜,并对固定化的参数进行了探索和优化:载体材料浸泡48h,戊二醛浓度0.005%,牛血清白蛋白浓度0.5%,缓冲液pH值6.0,固定化温度4℃,固定化时间12h,最终酶活回收率可达到31.03%。每批次固定化酶活力变异系数均小