论文部分内容阅读
随着人们生活水平的不断提高和环保意识的增强,对重金属污染尤为关注,残留检测急需加强。但常用的重金属检测方法需依靠大型仪器,大都存在样品处理繁琐、费用高、检测时间长等缺陷。本研究利用鳌合剂螯合Cd2+、偶联载体蛋白体外合成Cd2+免疫抗原和检测抗原;利用紫外分光光度法、三硝基苯磺酸法、以及抗血清效价检测对其进行评估;利用单克隆抗体制备技术初步建立镉离子的ELISA检测方法;旨在为重金属Cd2+的残留检测提供一种方便、准确、特异、低廉、快速的新技术。结果:（1）合成抗原紫外吸收峰与载体蛋白紫外吸收峰有明显差异,游离氨基含量在33%～40%之间。（2）100μg/只剂量免疫小鼠后,抗血清效价明显高于50、200μg/只剂量免疫的小鼠,抗血清效价在1:81 920以上。（3）50%的PEG,SP2/0与小鼠脾细胞细胞比例为1:7.1时,融合率高达98.4%。（4）用BSA-IEDTA-Cd和BSA-IEDTA检测细胞上清,筛选出了2孔阳性杂交瘤细胞1A1和4E7,阳性率为0.35%;经3次阳性率100%的克隆后只获得了抗Cd2+的杂交瘤细胞株1A1。（5）利用已建立的间接竞争ELISA法检测发现,1A1细胞上清效价在1:1 024以上,腹水效价高于1:256 000。（6）腹水蛋白浓度为15.04 mg/mL,单克隆抗体为IgG1。结论:（1）IEDTA可以用于重金属Cd2+免疫抗原或检测抗原合成的螯合剂。（2）KLH作为免疫抗原的载体蛋白,免疫效果优于以BSA为载体蛋白;BSA用于检测抗原载体蛋白,可以降低成本,检测结果也相对稳定。（3）合理的免疫方案有助于产生高效价的抗血清,免疫效果与免疫剂量间无正相关性。（4）实验虽已制备出抗Cd2+的单克隆抗体,但细胞融合阳性较低,克隆不够稳定,抗原合成工艺尚需进一步优化。