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研究背景:正常妊娠时,子宫内膜对胚泡植入的接受存在一个短暂的植入窗口期——黄体生成激素(LH)峰后的7～11d,只有在此期才能顺利完成胚胎着床,同时人娠是一种成功的同种半异体移植,着床中免疫问题十分重要。母胎之间的免疫联系是一种双向交流模式,受两方面的决定:胎儿抗原的暴露;母体系统对抗原的识别和应答。因此,成功的植入有赖于子宫内膜和胚胎的相互识别、耐受,甚至一个微小的紊乱或失调都会阻止植入的发生。母体免疫系统尤其是子宫内膜局部的免疫细胞能否识别并耐受胚胎抗原,直接影响妊娠的建立与维持,母体免疫系统对胚胎的免疫识别受T、B、自然杀伤(NK)细胞等一系列免疫细胞及细胞因子的调节。NK细胞是先天性免疫系统的重要组成部分,尤其是在抗病毒、寄生虫和微生物感染的早期免疫反应过程中发挥着重要的作用。子宫内膜NK(uNK)细胞是子宫内膜最重要的淋巴细胞,具有杀伤活性、分泌植入相关因子、控制滋养细胞侵入、改造螺旋动脉以及维持母胎界面免疫平衡等作用。大量研究表明植入窗期子宫内膜NK细胞数量及活性的异常可能会导致植入失败和习惯性流产。米非司酮(mifepristone,RU486)是人类合成的一种19-去甲类固醇,主要在受体水平上发挥作用。米非司酮是第一个用于临床的孕激素受体拮抗剂,目前已广泛应用于抗早孕。20世纪90年代,国内外均有报道米非司酮广泛用于临床紧急避孕,且用药剂量在逐步减少。近年来,研究发现每日给予低剂量米非司酮,能阻止内膜发育而起避孕作用,即所谓的“内膜避孕”,对月经周期影响少,无明显副作用。本文利用体外培养系统,运用免疫组化和四甲基偶氮唑盐(MTT)技术,研究低剂量米非司酮(分别为65 nmol/L、200 nmol/L)对人植入窗期子宫内膜自然杀伤细胞杀伤活性的影响,以探讨低剂量米非司酮作为抗着床避孕药的免疫学机制。材料与方法:收集12例因输卵管切除或丈夫不育,行IVF-ET妇女的子宫内膜。入选妇女月经史、生殖系统解剖、内分泌等指标均正常,近3个月内无激素类药物使用史,于月经周期第20至24天取内膜。每例内膜分成三等份,给予不同处理(分别为对照组、65 nmol/L组、200nmol/L组),组织培养24小时。采用MTT实验法,检测低剂量米非司酮对人植入窗期uNK细胞杀伤活性的影响;上下两张切片两两配对EnVision二步法染色,检测低剂量米非司酮对植入窗期uNK细胞表达PFP的影响。结果:1.子宫内膜组织块体外培养前后形态学观察:培养前后子宫内膜均处于分泌中期,腺体、血管结构均完整,间质水肿无明显改变。2.子宫内膜NK细胞杀伤活性的变化三组子宫内膜NK细胞杀伤活性(%)分别为:对照组13.52±3.12,65nmol/L组22.33±4.53,200nmol/L组30.55±6.09。三组uNK细胞杀伤活性有显著差异(P=0.01);两实验组分别与对照组相比,显著增高(P＜0.05);两实验组之间有显著差异(P＜0.05)3.子宫内膜NK细胞表达PFP的变化PFP阳性细胞着色为棕黄色,定位于胞浆;CD56阳性为棕黄色,定位于胞膜。阳性细胞主要分布在腺体和血管周围的间质(见图2)。三组内膜PFPCD56阳性细胞平均数分别为:对照组60±7,65nmol/L组80±6,200nmol/L组92±7。三组PFPCD56阳性细胞数有显著差异(P=0.01);两实验组分别与对照组相比,显著增高(P＜0.05);两实验组之间有显著差异(P＜0.05)结论:1.低剂量米非司酮能增加植入窗期uNK细胞杀伤活性,提示低剂量米非司酮可能以此破坏了人植入窗期子宫内膜局部免疫微环境的平衡。2.低剂量米非司酮能增加植入窗期PFP+CD56+阳性细胞的数量,提示低剂量米非司酮增加植入窗期uNK细胞杀伤活性可能通过uNK细胞表达PFP水平的变化来实现。