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近年来,随着工农业的迅速发展,人们的生活水平日益提高的同时,食品、饮水安全问题日渐成为社会普遍关注的问题。其中,水中病原菌污染问题是主要的问题之一。大肠杆菌(E.coli)是人和许多动物肠道中的常居菌,常随粪便排出体外,容易造成水源的污染。作为温血动物肠道细菌的代表,E.coli常作为饮水和食物(或药物)的卫生学标准。E.coli一般情况下不致病,少数条件下具有致病性,会引起严重的甚至危及生命的疾病,比如血性腹泻,出血性肠炎,肾衰竭以及脑膜炎等,给人们的健康造成巨大的威胁。因此,快速灵敏地检测水中的E.coli是及时有效控制与预防水污染的前提。目前,常用的检测E.coli的方法有细菌培养和生物化学鉴定、酶底物法、酶联免疫吸附分析法(ELISA)、侧向免疫分析法(LFA)、聚合酶链式反应(PCR)等。这些方法虽然可以实现E.coli的检测,但是存在检测时间长,检测仪器昂贵,操作步骤复杂等缺点,不适合用于现场检测。近年来新兴的微流控纸芯片技术由于其价格低廉、使用方便、操作简单、检测迅速等优点,在检测领域受到了越来越广泛的关注。本研究中制备了一种微流控纸基芯片装置用于专一性地检测E.coli,同时,结合功能化磁性纳米粒子富集细菌,提高了检测的灵敏度,实现了E.coli的裂解和低消耗、可视化、定量检测。本论文得到的结果如下:1.使用实验室制备的多聚赖氨酸功能化磁性纳米粒子(PLL-Fe3O4)富集E.coli,该纳米颗粒在pH小于9的环境中表面带有正电荷,可以通过静电相互作用与表面带负电荷的E.coli结合,在外加磁铁的作用下实现细菌的富集。3 mg/ml PLL-Fe3O4,时间4 min,其富集效率达到97%,实现了高效、快速的细菌富集。2.切纸的方法设计制备了一种含有裂解区和检测区的纸基芯片,用PDMS透明薄层对纸芯片进行封装,减少了芯片保存过程中试剂的蒸发和污染,提高了便携性。通过食品染料测试,PBS引流可以实现液体的定向流动和两种液体的混合。3.使用制备的纸基芯片对富集后的E.coli进行裂解和检测,以6 m M的5-溴-4-氯3-吲哚-β-D-葡萄糖苷酸盐(X-Gluc)为底物,50℃条件下,反应2 h,实现了E.coli的连续裂解和可视化定量检测。同时,进行了金黄色葡萄球菌(S.aureus)、沙门氏菌(Salmonella)以及李斯特菌(L.monocytogenes)的检测,结果不产生颜色反应,说明制备的纸基芯片检测有较好的专一性。最后,进行了矿泉水中的E.coli检测,检测限低至102 cfu/ml。以上结果说明制备的纸基芯片装置可以实现E.coli的专一灵敏的可视化定量检测。