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高血压是一种以动脉血压升高为主要症状的慢性心脑血管疾病,不仅患病率高,而且可引发心、脑、肾、视网膜等器官损伤及代谢的改变,并能导致冠心病、心肌梗塞和肾功能衰竭等疾病。血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)是目前用于预防治疗高血压的重要药物之一,其中,安全性高、副作用小、易吸收的食源性ACEI尤其引入关注,已成为生物活性肽研究领域的热点之一。酶-膜耦合反应器已广泛应用于食品工业,并且越来越受到人们的关注。
采用福林法,对选用的碱性蛋白酶的热稳定性进行研究,在180 min内不同时刻测定碱性蛋白酶在40℃、50℃、55℃、57.5℃、60℃温度下酶活性,酶的初始酶活性随着温度的增加而提高,随着保温时间的延长,不同温度下,酶的残存酶活率(Rα)变化较大,在40-55℃下,180 min后Rα依然在90%以上,57.5℃下保温180分钟Rα已降至23.7%,60℃下保温180分钟Rα只有2.2%,确定碱性蛋白酶的合适操作温度为55℃。
以马氏珠母贝肉为原料,采用酶-膜耦合反应器酶解马氏珠母贝肉制备降血压肽,以多肽提取率(D)为指标,考察了温度、底物浓度、酶用量、pH值和操作压力对D的影响,确定了酶膜反应的最佳工艺条件为:温度为55℃、底物浓度为10 g·L-1、酶浓度为0.09 g·L-1、pH值为9.5、操作压力为0.3 MPa,此时D达到41.69%以上,IC50值为0.0636 mg·mL-1。
采用Tricine-SDS-PAGE法和凝胶色谱法测贝多肽分子量(Mw),结果表明,凝胶色谱法更适合贝多肽Mw测定,酶-膜反应产物的Mw在1569 Da以下,Mw范围469~1569 Da占74.34%;间歇反应产物的Mw在1474 Da以下,Mw范围477~1474 Da占77%。由此可知,马氏珠母贝肉多肽是Mw为1570 Da以下的低分子小肽。