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目的1.体外长期培养观察成人急性淋巴细胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)骨髓原代细胞,分离、扩增正常人及成人ALL患者骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell, BM-MSCs)。2.探讨BM-MSCs对于淋巴细胞白血病细胞株天冬酰胺酶耐药性的影响。方法1.成人急性淋巴细胞性白血病患者(20例)骨髓原代细胞长期培养,倒置显微镜下观察BM-MSCs的细胞形态和生长特性。2.正常人、成人急性淋巴细胞性白血病患者BM-MSCs的分离、扩增。3.培养四种不同淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat、CEM、CA46、nalm-6),不同浓度的天冬酰胺酶处理,MTT法检测各细胞株天冬酰胺酶IC50(50%抑制率)4.四种淋巴细胞株分别与正常人及ALL患者BM-MSCs共培养,MTT法检测共培养前后淋巴细胞株增殖能力的变化;天冬酰胺酶处理与正常人及ALL患者BM-MSCs共培养的细胞株, MTT法检测共培养前后细胞株对天冬酰胺酶诱导的凋亡情况变化。5.实时荧光定量PCR检测共培养和/或天冬酰胺酶处理前后细胞株、BM-MSCs天冬酰胺合成酶(ASNS)表达情况。结果1.成人ALL患者(20例)中初治患者(4例)骨髓单核细胞悬液接种后,1-2周内未出现贴壁生长,3周后细胞渐死亡;复发患者(5例)多数未见贴壁细胞,少数出现少量细胞贴壁生长,但无明显增生,4-5周渐凋亡;化疗1-2次未CR患者(3例)及CR患者(5/8例)骨髓单核细胞悬液接种后48-72h后贴壁,梭形基质细胞生长,1-2周出现“鹅卵石”区,并可在体外培养条件下长期生存; 3/8例分离所得单个核细胞较少,未见贴壁现象;ALL患者骨髓MSCs呈梭形贴壁生长,能在体外连续传代,能冷冻保存。2. a. ASNS表达:初治ALL患者较低或极低,正常人对照表达均较高。b.不同细胞株与正常人MCSs共培养增殖情况变化(MTT检测) :1-2天共培养组较对照组增殖慢,3-5天超过对照组(P<0.01)。即正常人MCSs初始抑制白血病细胞株生长,共培养3-5天后,促进其生长。c.4种细胞株天冬酰胺酶IC50浓度(MTT法测定3次以上x±s)以Jurkat最大(P<0.01)。d.细胞株与MSCs共培养并天冬酰胺酶处理,共培养组抑制率明显低于对照组(P<0.01)。e.细胞株与MSCs共培养及天冬酰胺酶处理后,实时荧光定量PCR检测细胞株ASNS基因表达无明显变化,MSCsASNS基因表达较细胞株明显增高。结论1、成人急性淋巴细胞性白血病初治及复发患者骨髓基质细胞生长受到抑制,缓解及部分化疗过的患者骨髓基质细胞可在体外长期生长;2、MSCs利于淋巴细胞白血病细胞株天冬酰胺酶耐药,其机制可能是通过上调MSCs天冬酰胺合成酶的表达实现。