菲降解细菌的分离鉴定及其降解效果的研究

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多环芳烃(Polycyclic aromatic hydrocarbon,PAHs)在环境中分布十分广泛,极易在环境中累积并可通过食物链传递,对人类健康和生态环境具有很大危害性。菲因具有独特的化学结构,成为PAHs研究的模式化合物,菲污染的研究不仅有利于污染环境中菲的去除,还可为其它PAHs污染的防治提供有价值的资料。本研究利用选择性富集培养,从受污染土壤中分离到三株菲降解细菌,命名为C22,C13,C8;应用形态观察以及分子生物学手段相结合的方法对三株菌进行鉴定,菌株C22,C13,C8分别被初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),贪铜菌属(Cupriavidus sp.)和类芽孢杆菌属(Paenibacillus sp.);实验中利用高效液相色谱法(HPLC)测定显示三株细菌在液体培养条件下都表现出较强降解菲的能力,通过测定液体培养基中菲浓度和菌体密度变化,发现菌株降解菲的量与其生长密度相关,随着菌体浓度(OD)的增加,代谢底物菲的浓度明显降低;菌株混合使用能够大幅度提高菲的降解能力;菌株C22具有良好的pH和菲含量适应性,初始pH8.0更有利于菌株的生长和菲的彻底降解;有机物酵母膏、葡萄糖的加入可以不同程度加快菌株C22对菲的降解;Tween-80的加入也对菲降解效率有显著促进作用;与菲的单基质培养相比,多环芳烃萘、菲的共基质培养也促进了C22菌株对菲的降解;酶活测定实验显示菌株C22具有PAHs诱导的邻苯二酚2,3—双加氧酶(C230)活性;底物实验结果和降解酶活性测定表明,菌株C22可能通过水杨酸途径来降解菲;采用特异性引物,扩增菌株C22的C230编码基因全序列。
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