骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是一种常见的退行性关节疾病,在高龄人群中的发病率较高,常导致患者关节软骨退化及关节内骨质增生、变形等。手术治疗OA费用高、疗效有限且患者顺应性较差。口服给药治疗OA胃肠毒副作用大,局部血药浓度低且疗效较差。局部外用制剂透皮吸收差且对局部皮肤有刺激性。因此关节腔注射给药治疗OA逐渐成为OA治疗的研究热点。　　 氯诺昔康是一种新型的非甾体类抗炎药,具有很好的抗炎、镇痛和解热作用。此外,氯诺昔康对OA具有双重治疗作用,既能达到镇痛和抗炎的目的又能减轻关节炎的破坏并防止骨变性,修复受损关节。但氯诺昔康普通注射剂关节腔给药后药物会迅速渗漏进入血液循环,降低了局部药物浓度。另外,药物渗漏至体循环后导致全身吸收,增加了毒副作用。氯诺昔康半衰期短,为了维持药效必须长期、频繁用药降低了病人的顺应性。　　 本课题以性能优良的生物可降解和生物相容性的载体材料乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)为载体材料,采用乳化-溶剂挥发法制备关节腔注射用氯诺昔康PLGA微球。研究内容主要包括:氯诺昔康PLGA微球混悬液的制备及其干燥方法的筛选与优化、干燥微球的理化性质研究与体外释药机理研究、灭菌方法与稳定性研究、生物相容性和药效学研究。　　 1干燥氯诺昔康PLGA微球的制备和理化性质的研究　　 本文采用S/O/W乳化溶剂挥发法制备氯诺昔康PLGA微球。首先,以微球表面形态、粒径及粒度分布为指标考察了冷冻干燥及真空干燥两种干燥方法对微球性质的影响,结果表明:真空干燥的氯诺昔康PLGA微球粘连严重,不适合用于氯诺昔康PLGA微球的干燥,故选择冷冻干燥法干燥微球并对冻干进行了优化。其次,对冷冻干燥工艺进行了优化；最后,采用优化的冷冻干燥工艺制备三批氯诺昔康PLGA微球,对理化性质进行研究。结果表明,优化的冻干工艺为:以2％的甘露醇为冻干保护剂,-80℃冰箱预冻8h后放入冷冻干燥机内冷冻干燥12h得到干燥疏松的微球粉末。光学显微镜和扫描电镜下观察,氯诺昔康PLGA微球外形圆整、无粘连；经DSC分析,氯诺昔康PLGA微球确已形成；平均粒径为(7.51±0.35)μm；包封率和载药量分别为(81.88±1.28)％和(12.89±0.49)％；复溶后pH值近中性,达到2005版药典规定的要求。　　 2氯诺昔康PLGA微球体外释药性与降解机理的研究　　 采用动态膜透析法对冷冻干燥氯诺昔康PLGA微球体外释药性进行考察。采用提高释放介质温度和搅拌速度的方法建立了加速释药方法以缩短评价周期。从外观、粒径变化和失重率三个方面研究氯诺昔康PLGA微球的降解机制。　　 结果表明,氯诺昔康PLGA微球体外释放可达32天,释药曲线经拟合符合Weibull模型。对常规释放和加速释放试验数据进行点对点相关性拟合,二者相关性较好(r=0.9993),说明可用体外短期加速释放实验预测常规释放的数据。微球在体外释放20天,微球表面孔道明显增多,但微球形状变化不明显。体外释放30天微球塌陷,外观形态发生彻底改变。说明氯诺昔康PLGA微球在释放前期主要为扩散机理,而后期主要为溶蚀机理。　　 3氯诺昔康PLGA微球灭菌与稳定性考察　　 以灭菌后微球的外观形态、药物含量和加速释放为指标,考察了10kGy和15kGy的60Co辐射灭菌对微球理化的影响,确定了合适的辐射灭菌强度。稳定性实验以外观形态和药物含量为考察指标,通过影响因素试验、加速实验和长期实验考察微球的初步稳定性。　　 结果表明,10kGy和15kGy60Co辐射灭菌对该微球制剂无明显影响,灭菌后的微球微生物检查合格。氯诺昔康PLGA微球在高温、高湿条件下性质均不稳定,应在低温干燥的环境中保存。　　 4氯诺昔康PLGA微球体内生物相容性与药效学研究　　 以健康大鼠为模型动物,以生理盐水为对照,关节腔注射空白PLGA微球和氯诺昔康PLGA微球,对不同时间点大鼠膝关节组织进行病理切片观察,评价空白微球和载药微球对局部组织的损伤程度。以OA模型大鼠为实验动物,采用关节腔分别注射氯诺昔康注射液(每周一次,1.2mg/0.1ml,连续给药6周)和氯诺昔康PLGA微球混悬液(给药一次,2.4mg/0.1ml)。给药6周后处死大鼠,采用Mankin关节病组织学评分和造模前、造模后及给药后不同时间膝关节的直径和膝关节活动度为指标,比较氯诺昔康注射液与氯诺昔康PLGA微球对膝骨关节炎的治疗作用。　　 结果显示,关节腔注射氯诺昔康载药微球1天后可见滑膜组织的炎性改变,关节软骨未见明显异常。3天后炎性改变减轻,1周以后炎性改变基本恢复,趋于正常。空白PLGA微球与氯诺昔康载药微球相比无明显差别。结果说明氯诺昔康PLGA微球生物相容性良好,可用于关节腔注射给药。对骨关节炎的治疗作用,微球组与注射液组治疗效果基本相同。此外,关节腔注射微球制剂给药剂量小,对患者的创伤少,患者的顺应性好,易被患者接受。　　 结论:本文制备的关节腔注射用氯诺昔康PLGA微球有效克服了常规注射剂治疗时用药频繁、患者顺应性差等不足,氯诺昔康PLGA微球延长了药物作用时间,减少了给药量并提高了病人用药的顺应性,具有良好的社会价值和临床应用前景。　　 本课题成功研制了氯诺昔康PLGA微球,采用冷冻干燥法制得了性质稳定的干燥微球。所采用的制备工艺简便可行,重现性好,包封率较高,体外缓释效果良好,释药曲线符合Weibull方程。本文建立了体外短期加速释放试验法用以考察长效制剂的体外释放情况,结果表明,加速释药方法可以很好的预测长效制剂的体外释药行为,且可缩短评价周期。采用10KGy和15kGy60Co辐射灭菌后微球理化性质无明显改变,微生物限度检查结果合格。生物相容性考察结果显示氯诺昔康PLGA微球生物相容性良好,可用于关节腔注射给药。药效学考察结果说明,氯诺昔康PLGA微球可在降低给药剂量的条件下达到与注射液相当的治疗效果。　　 总之,本文采用长效缓释微球为载体,创新性地改进了非甾体抗炎药氯诺昔康用于骨关节炎的治疗；通过关节腔注射用氯诺昔康PLGA微球的制备、理化性质研究、生物相容性和药效学研究,丰富了非甾体抗炎药制剂和骨关节炎治疗的研究内容。氯诺昔康PLGA微球延长了药物作用时间,减少了给药剂量并提高了病人用药的顺应性,具有良好的社会价值和临床应用前景。