CEA分泌性肿瘤微转移检测方法的建立及其临床意义

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建立一种外周血循环中CEA分泌性肿瘤微转移检测的方法,并研究其临床意义。首先分离外周血有核细胞,进行细胞总RNA的快速抽提。以抽提出的RNA为模板,分别以引物①、②进行逆转录得到cDNA,再以其为模板进行PCR扩增,得到特定的CEA DNA片段。5%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析逆转录PCR产物,并进行限制性内切酶酶切分析及DNA序列测定。结果:外周血有核细胞总RNA OD260/280值为1.5~1.8,电泳鉴定为28S、18S RNA。逆转录PCR产物经电泳分析其分子量大小分别为131bp及338bp。前者经酶切后得到59bp和72bp两个片段。两种PCR阳性产物经DNA测序,均与文献报道一致。46例CEA分泌性肿瘤检测CEA mRNA阳性25例(54.35%),对照组中有1例检出CEA mRNA。CEA分泌性肿瘤病人中,临床有远处转移组CEA mRNA阳性率明显高于无远处转移组(P<0.005)。对无远处转移而CEA mRNA阳性的病人随访半年,3例出现远处转移,提示CEA mRNA的RT-PCR检测可作为预测肿瘤早期转移的指标之一。CEA mRNA阳性率与肿瘤的临床分期成正相关(P<0.005),而与年龄、血清CEA水平无显著关系(P>0.05)。术前CEA mRNA阴性,术后转为阳性的有2例,可能与手术操作导致肿瘤细胞入血有关。
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