【摘 要】
：
在生猪养殖过程中,母猪的繁殖力是影响猪场生产效益的重要因素,繁殖障碍性疾病导致的卵巢功能异常、流产、死胎和木乃伊胎等给养猪业造成了重大的经济损失。猪妊娠过程中,胎儿的生长发育受诸多因素影响,非遗传和疾病因素导致的分娩前胚胎损失率高达40%。R-Spondin3（RSPO3）是最早被发现的RSPOs家族成员,在胚胎发育过程中起着重要作用。Rspo3缺失的小鼠由于胎盘血管形成缺陷不能侵入绒毛膜导致胎儿
【基金项目】
：
国家自然科学基金（31572591、31772819、81830041）； 湖南省研究生科研创新项目（CX2018B401）:R-Spondin3对猪滋养层细胞功能的影响,2018.10-2020.10；
论文部分内容阅读
在生猪养殖过程中,母猪的繁殖力是影响猪场生产效益的重要因素,繁殖障碍性疾病导致的卵巢功能异常、流产、死胎和木乃伊胎等给养猪业造成了重大的经济损失。猪妊娠过程中,胎儿的生长发育受诸多因素影响,非遗传和疾病因素导致的分娩前胚胎损失率高达40%。R-Spondin3（RSPO3）是最早被发现的RSPOs家族成员,在胚胎发育过程中起着重要作用。Rspo3缺失的小鼠由于胎盘血管形成缺陷不能侵入绒毛膜导致胎儿在出前死亡,RSPO3是否在猪胎盘发育过程中起着重要作用从而影响着胎儿的生长发育尚无相关报道。为阐明RSPO3在猪胎盘发育过程中的作用,本研究首先克隆了猪胎盘RSPO3 m RNA序列,确定RSPO3在不同妊娠时期母胎界面的表达与定位;其次,通过慢病毒系统介导RSPO3的过表达和下调研究其对猪胎盘滋养层细胞和子宫内膜基质细胞功能的影响;最后通过小鼠囊胚感染慢病毒使胎盘特异性过表达猪RSPO3蛋白研究其对胚胎/胎儿生长发育的影响。主要研究结果如下:（1）RSPO3在猪母胎界面的表达与分析。克隆的猪胎盘RSPO3 m RNA序列全长为1337 bp,与NCBI公布的猪RSPO3 m RNA序列在第180位点存在一处差异碱基T→C;其与牛、羊的亲缘关系较近,与斑马鱼、半滑舌鳎的亲缘关系较远。猪胎盘RSPO3 m RNA编码275个氨基酸,与NCBI公布的猪RSPO3氨基酸序列一致,蛋白结构含两相邻Furin样结构域、TSR结构域、N端疏水信号肽和C端残基。RSPO3在猪不同妊娠阶段母胎界面的表达有一定差异,其m RNA及蛋白在妊娠40天母体子宫和胎儿胎盘的表达高于妊娠25天和70天,且RSPO3蛋白主要定位于母胎界面的胎儿胎盘绒毛滋养层、子宫内膜基质和腺上皮。（2）RSPO3对猪滋养层细胞和子宫内膜基质细胞功能的影响。本研究成功建立了RSPO3过表达和下调猪滋养层细胞和子宫内膜基质细胞。在猪滋养层细胞中,RSPO3过表达后可显著抑制细胞的增殖、浸润和小管形成,显著促进Wnt/β-catenin信号通路中CCND1、c-Myc和β-catenin的表达,抑制GSK-3β和Axin2的表达,而RSPO3下调表达后则起到相反的作用。进一步研究发现Wnt/β-catenin通路抑制剂处理后能增强RSPO3对猪滋养层细胞增殖及小管形成的抑制作用,减弱RSPO3对猪滋养层细胞CCND1、c-Myc和β-catenin蛋白表达的促进作用。此外,RSPO3过表达可促进猪滋养层细胞与血管内皮细胞交互形成小管,而下调RSPO3则起抑制作用。RSPO3过表达及下调对猪滋养层细胞的凋亡无影响;在猪滋养层细胞中没有检测到E2和P4的分泌,但RSPO3过表达促进其激素相关合成酶17β-HSD、3β-HSD和CYP19A1 m RNA的表达,下调时则抑制17β-HSD和3β-HSD m RNA的表达。在猪子宫内膜基质细胞中,RSPO3过表达促进猪子宫内膜基质细胞的增殖,下调则抑制;RSPO3过表达及下调均减弱猪子宫内膜基质细胞与血管内皮细胞的交互作用。同样地,RSPO3过表达能激活猪子宫内膜基质细胞Wnt/β-catenin信号通路。（3）小鼠胎盘特异过表达猪RSPO3对胎儿胎盘生长发育的影响。Rspo3m RNA和蛋白在小鼠不同妊娠时期胎盘中的表达呈现逐渐降低趋势,RSPO3蛋白在小鼠子宫内膜基质、胎盘滋养层和迷回路层的表达信号较强,在妊娠第10和12天的表达丰度较高,与其在猪胎盘中的表达规律相似。在小鼠模型中发现胎盘特异性过表达猪RSPO3能显著增加孕鼠妊娠第12天的空腹血糖和心率、妊娠第18天胎儿的重量和冠臀长、妊娠15和18天胎儿的腹围,而对孕鼠血压、尿蛋白和肝、肾脏器无影响。综上所述,本论文揭示了RSPO3在猪不同妊娠时期母胎界面的表达规律,明确了RSPO3能调控猪滋养层细胞和子宫内膜基质细胞的相关功能,体内进一步阐明了小鼠胎盘特异性过表达猪RSPO3能促进胎儿的生长。本研究可为探讨母猪妊娠过程中胎儿损失的具体机制提供一定的理论依据,同时也可为研发有利于胎儿生长发育的新技术提供思路。
其他文献
再生稻作为一种“一种两收”的水稻种植模式,具有生产成本低、经济效益高的特点,且研究表明再生季稻米是品质好、食味佳的优质稻米。本研究于2017～2020年,选取多个水稻品种为材料,开展了品种、不同生态区、不同季别种植（再生稻、一季晚稻、双季晚稻）对再生稻再生季稻米品质的影响试验、控温条件下的再生季稻米品质变化规律试验,探究了再生季稻米品质与淀粉晶体结构、理化性能的相互关系,为稻米品质调优提供了理论依
目的 探讨BRAF V600E基因检测对超声高危、细胞学BethesdaⅠ类甲状腺结节良恶性的鉴别诊断价值，以及与BRAF V600E基因突变相关的临床超声特征。方法 回顾性分析郑州大学第一附属医院2018年3月至2019年6月经超声诊断为高危且细针穿刺判读为细胞学BethesdaⅠ类的甲状腺结节共780例，其中行BRAF V600E基因检测且有组织病理结果的共70例，将这些患者纳入研究。计算BR
猪肉是我国最大众化的肉类食品,如何减少猪腹部和皮下脂肪沉积,从摄食源头减少过多的脂肪和胆固醇摄入一直是猪营养研究的热点话题。诸多研究发现,在饮食或日粮中添加乳酸菌制剂可降低人或动物体内甘油三酯和胆固醇含量,但是其具体的作用机理仍不清楚。基于课题组前期在猪上的研究,我们推测德氏乳杆菌在回肠段可能通过干扰胆汁酸肠肝循环来降低血清胆固醇水平,在后肠段可能通过代谢产物短链脂肪酸（SCFA）来介导肠外组织中
产教融合校企协同育人是提升高职人才培养质量的重要手段，关系到高职教育是否能办出特色、专业发展是否能对接产业需求。本文通过研究数字媒体技术专业在人才培养过程中面临的瓶颈，提出了“一二三四”人才培养模式，探究依托产业学院校企协同育人的实践途径。
我国是世界上最早大面积利用水稻杂种优势的国家,杂交水稻的发展为保障我国、乃至世界粮食安全做出了巨大贡献。随着社会不断进步,“吃好”成为“吃饱”之后的普遍需求。在满足高产、适应性好等基本要求基础上,“好不好吃”决定了杂交稻品种的市场竞争力。杂交稻食味品质形成的遗传基础较常规稻复杂,其胚乳性状不仅受父母本共同影响,作为食用部分的稻米是来源于F1植株上结的种子（F2）,从遗传组成来看,杂交稻不同籽粒之间
千金子（Leptochloa chinensis）是我国水直播稻田里仅次于稗草（Echinochloa crus-galli）的第二大危害性禾本科杂草。氰氟草酯属于乙酰辅酶A羧化酶（acetyl-Co A carboxylase,ACCase）抑制剂类除草剂,且为水稻田千金子苗后防除的主流药剂。由于千金子的严重发生和氰氟草酯的不合理使用,致使千金子对氰氟草酯的抗药性问题日益突出。因此,研究不同区域
水稻颖壳的发育直接影响其产量、品质及种子质量。本研究以超级稻品种隆两优华占的父本“华占”和母本“隆科638S”的颖壳突变体为试验材料,拟通过图位克隆和基因功能分析,研究水稻颖壳形态建成与发育的分子机理。利用Co60γ射线辐射处理“华占”和“隆科638S”后,在M2群体中获得内稃退化的华占突变体hzp和颖壳不闭合的隆科638S突变体ug1,并对突变体进行了形态特征观察和相关农艺性状分析。通过图位克隆
本研究以中早39和湘早籼45号为材料,2015年开展了免耕半固态直播条件下适宜配比（半固态基质与有机肥）与每穴苗数对水稻产量形成的影响研究,2016-2017年开展了4种栽培模式（免耕半固态直播、翻耕半固态直播、人工移栽和撒直播）对水稻根冠特征及其产量形成的影响研究。主要研究结果如下:1、免耕半固态直播条件下,有机肥与半固态基质（含水量约55～60%稀泥）的质量比为1:10处理的产量最高,为8.1
多年来关于钙元素在蛋禽中营养作用的共识是:钙是维持产蛋家禽蛋壳和骨骼形成的必需矿物元素。然而更多的证据表明,饲粮中钙水平与产蛋数（表现为产蛋率）存在紧密联系,饲粮钙缺乏对产蛋率具有显著负面影响,且性成熟的蛋鸭排卵数对饲粮中钙水平有依赖效应（本课题组未发表的数据）。由于蛋禽产蛋数与成熟卵泡排卵数紧密相关,因此,饲粮中钙除参与蛋壳形成外,很可能也参与了卵母细胞发育成熟调控。但目前,关于钙元素在蛋鸭乃至
随着职业能力在高职课程体系构建中的重要性日益突出，目前对高职数字媒体技术专业群课程体系的职业能力理解不足、课程设置不完善、教学方法单一等问题也逐步显现。高职院校应基于职业能力构建数字媒体技术专业群课程体系，进行职业能力分析与设定，确定课程目标和内容，实施有效的课程评估，从而有效提高专业教育教学的质量和效果。