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不产氧光合细菌一直是阐明光合作用机理的良好模型生物。光合作用过程中光能吸收、传递和转化是由光合膜上不同类型的色素蛋白复合体(PPC)分工协作完成,其中捕光色素蛋白复合体(LH)主要完成光能的吸收和激发能的传递,相对于核心捕光色素蛋白复合体(LH1)而言,外周捕光色素蛋白复合体的数量及光谱类型存在多样性。目前报道有3种光谱类型不同的外周捕光复合体,包括典型LH2(B800-850,T-LH2)、LH3(B800-820)和LH4(B800或B800-850-low)。 我们前期研究发现,固氮红细菌(Rhodobacter azotoformans)R7活细胞吸收光谱类胡萝卜素(Car)区呈现一个额外423nm吸收峰,并纯化获得一种不同于T-LH2的外周捕光复合体:除在800nm和850 nm有特征吸收峰外,在423nm处还有一个较强吸收峰,命名为U-LH2。普遍认为,423nm吸收峰位于Car区域,是由Car积累所导致。本文主要阐明423nm吸收峰产生的生理条件、物质基础以及引起423nm吸收峰物质对U-LH2结构与功能的影响。主要从以下几方面开展系统研究:通过优化条件获得菌株产生423nm吸收峰的环境因素;通过对全色素组分比较,探求引起423nm吸收峰的物质基础;进一步通过色素与蛋白相互作用研究,确证引起423nm吸收峰的物质是合成细菌叶绿素a(BChl a)前体物质-镁原卟啉Ⅸ单甲基酯(MPE),而不是Car;通过对U-LH2和T-LH2的结构、功能和稳定性等的比较分析,阐明引起423nm吸收峰物质结合对LH2结构和功能的影响;还进一步探求了Car结构与LH2能量传递效率的关系和规律。主要研究结果如下: R7细胞可在3000lux光照厌氧条件下,在乙酸钠-琥珀酸钠培养基(SS)产生423nm吸收峰,而在乙酸钠-酵母粉培养基(YE)中不产生423nm吸收峰。在SS培养基中,R7菌株生长周期延长,生物量也降低,胞外pH变化较小。全色素分析表明,SS和YE条件下,R7菌株均积累细菌叶绿素(BChl)a的2种衍生物,Car组分也无差异,所不同的是SS条件下R7菌株还大量积累一种含有415nm吸收峰的BChla前体物质-MPE,提示423nm吸收峰与MPE积累相关,而不是由Car积累所导致。进一步通过MPE与菌体蛋白相互作用研究证实,423nm吸收峰由MPE积累所致。 分别采用硫酸铵盐析和蔗糖密度梯度离心结合离子交换层析方法对Rba. azotoformans R7菌株色素蛋白复合体(PPC)进行分离纯化。结果表明,在常规培养条件下,硫酸铵盐析结合离子交换层析能纯化获得多种光谱类型的PPC,而且还能获得低丰度光谱类型的PPC。SS条件下,光合膜及膜片全色素提取液中具有423nm和415nm特征峰,说明MPE能够结合到光合膜上。SS条件下,胞内光合膜含量(A880/A660衡量)和LH2/LH1的摩尔比均较低,与光合生长下降相对应。采用吸收光谱法、硫酸铵盐析和DEAE柱层析等方法分离纯化PPC,获得了有和无423nm吸收峰的RC和LH2。以无423nm吸收峰LH2(T-LH2)为参照,对具有423nm的LH2(U-LH2)中蛋白亚基、色素组分等进行了详细的分析,表明在T-LH2中额外积累MPE。MPE与BSA、T-LH2脱辅基蛋白和T-LH2进行体外相互作用,表明MPE可以与T-LH2脱辅基蛋白和T-LH2结合,MPE吸收峰由游离时的415nm红移至423nm,证实了LH2中423nm的异常吸收峰是由MPE引起的。结果表明MPE不仅分布在光合膜上还可以结合到PPC上。 稳态荧光光谱测定结果显示,U-LH2具有捕获光能和传递能量的活性,但与T-LH2相比,能量传递效率降低。拉曼光谱表明2种LH2中结合Car类型相同,2种LH2中结合Car构象均为较伸展的平面构象。以类胡萝卜素和BChla特征吸收峰变化为指针比较分析了不同酸性pH值、碱性 pH值、SDS浓度和温度等对2种LH2结构稳定性的影响。结果表明MPE的结合对LH2的结构产生了一定的影响:对酸性pH值、碱性pH值的抗性降低;对B800和B850的SDS抗性产生不同的影响,B800抗性增加,B850抗性下降;对高温的抗性增强。 3种共轭长度和取代基不同的Car均能与部分缺失Car的LH2(LC-LH2)进行体外自组装,Car组装率约在24.0%~29.4%之间,其中SE和OK的组装率高于RP。重组Car在重组LH2中也呈现较为伸展的平面构象。重组LH2中能量传递效率与Car共轭体系大小成反相关关系,而与Car极性大小没有明显的关系。表明Car共轭长度仍是决定和影响LH2中Car-BChl能量传递效率的主要因素,而Car的取代基和极性影响较小。