目的:观察激素性股骨头坏死兔模型进程中股骨头内低氧状态下Wnt信号通路相关蛋白的表达,以及中药锁阳对激素性股骨头坏死低氧状态下兔模型Wnt信号通路的影响,探讨锁阳治疗股骨头坏死的作用机制,从而为股骨头坏死的临床治疗提供实验依据。方法:实验1:将健康成年新西兰大白兔24只,采用抽签法随机分为正常对照组、2周模型组及4周模型组,每组各8只。除正常对照组外,两组模型组均在实验第1d时通过耳缘静脉注射20μg/kg大肠杆菌内毒素。1d后进行第2次注射大肠杆菌内毒素,同时臀肌注射20mg/kg甲基强的松龙。然后每次间隔24h再给予注射甲基强的松龙2次。所有实验动物均在第1次注射内毒素前3d每天肌注青霉素4万U/rabbit以预防感染,此后改为每周2次。在实验开始、2周、4周分别对各组兔子抽取股动脉血监测血内氧分压。随机处死2只兔子行影像学检查及组织病理学对照观察,证实造模成功。造模成功后对股骨头进行取材,采用酶消化法-组织块法分离培养股骨头内成骨细胞,采用Western blot检测经典Wnt通路中β-catenin、Gsk 3β等信号分子蛋白的表达。实验2:造模方法同实验1,造模过程中,各组均给予常规喂养。模型组从造模后4周开始给予药物干预,给药时间8周;锁阳小剂量组给予锁阳提取液60m L/kg·d,相当于138g生药,分两次进行灌胃;大剂量组给予120m L/kg·d,相当于276g生药,分两次进行灌胃;安慰剂给予生理盐水100m L/kg·d,分两次进行灌胃。干预8周后,进行抽血取材,采用Western blot检测经典Wnt通路中β-catenin、Gsk 3β等信号分子蛋白的表达。整个实验过程中所有数据均采用SPSS18.0统计分析软件进行处理,计量资料数据均以均数±标准差((?)±s)表示。结果:实验1:(1)在造模的第1周,4周模型组1只兔子死于内毒素中毒,造模第2周,2周模型组有1只兔子死于麻醉。影像学观察和光镜下观察证明造模成功。(2)组织病理学观察:正常组股骨头内骨小梁结构、骨细胞、髓腔结构均正常。2周模型组:骨小梁排列分布仍较整齐,但髓腔内造血细胞减少,骨小梁之间和髓腔内的脂肪细胞数量却逐渐增加,形态变大,空骨陷窝较正常对照组有所增多。4周模型组骨小梁紊乱、稀疏,脂肪细胞明显增大、增多,造血细胞明显减少,空骨陷窝较2周模型组增多更为明显。(3)股动脉血氧分压检测:所有实验大白兔在实验第一天动脉血氧分压无明显差别。在实验第2周末,2周模型组与4周模型组之间无显著差别,但均明显低于正常组(P<0.05)。在实验第4周末,4周模型组显著低于正常组(P<0.05)。(4)Western blot方法:显示模型组动物经典Wnt通路中β-catenin、p-Gsk 3β、Cyclin D1蛋白的表达水平不断下调,Gsk 3β则随之升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。实验2:(1)在造模的第1周,锁阳小剂量组有1只兔子死于内毒素中毒,在第1周给药时,锁阳大剂量组有1只兔子死于灌胃后,第6周给药后安慰剂组1只兔子死亡。影像学观察和光镜下观察证明造模成功。(2)组织病理学观察:正常组股骨头内骨小梁结构、骨细胞、髓腔结构均正常。安慰剂组:骨小梁结构紊乱,稀疏,部分断裂,脂肪细胞明显增多,造血细胞明显减少,骨细胞核固缩,空骨陷窝明显增多。锁阳小剂量组:骨小梁排列仍相对稀疏,造血细胞有所增多,脂肪细胞相对减少,空骨陷窝数量亦有所降低。锁阳大剂量组:股骨头坏死情况明显改善,骨小梁结构基本清晰,多数骨细胞形态、结构正常,空骨陷窝明显减少,仍可见少量坏死骨细胞,髓内造血细胞较丰富,脂肪细胞明显减少。(3)如同实验1,所有实验大白兔在实验第一天股动脉血氧分压检测无差别。在实验第4周末,锁阳小剂量组、锁阳大剂量组和安慰剂组之间无明显差别,但都显著低于正常组(P<0.05)。在实验第12周末,锁阳小剂量组明显高于安慰剂组(P<0.05),同时明显低于锁阳大剂量组(P<0.05)。(4)Western blot方法显示兔激素性股骨头坏死模型在给予中药锁阳干预后,β-catenin、p-Gsk 3β、Cyclin D1蛋白的表达水平上调,Gsk 3β蛋白的表达受到抑制,且呈剂量依赖性,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在SANFH的病理过程中,股骨头内的成骨细胞长期处于缺血、缺氧状态,长期的低氧状态下对Wnt信号通路的表达必然产生相关影响。而中药锁阳具有抗氧化、耐氧及抗衰老等作用,其能够调控兔SANFH模型中Wnt信号通路的表达,呈剂量依赖性。