降解棉酚芽孢杆菌菌株的筛选、发酵工艺优化及其应用效果

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:yanqingkuiyan
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棉籽经压榨榨油处理后称为棉籽饼粕,棉籽饼粕是一种优质的植物性蛋白饲料,可以作为理想的蛋白质饲料。在粗饲料不足的中国,可在一定程度上弥补蛋白饲料资源不足。但是,由于棉籽饼粕中含有游离棉酚这一有毒物质,如果未经脱毒长期饲喂畜禽,则很易引起中毒甚至死亡,给养殖户造成巨大的经济损失。因此对棉籽饼粕进行脱毒处理,从而更高效、更安全的利用棉副产品对于畜牧养殖业来说意义重大。生物发酵法被普遍认为是当前最安全、脱毒效果好、生产成本低的脱毒方法。因为微生物固态发酵技术脱毒,具有脱毒率高、发酵时间短、投资小、设备和工艺简单、其工艺没有废水污染问题及成本低等优点,尤其是发酵过程能增加微生物代谢活性物质,并使纤维素分解转化成有价值的菌体蛋白,同时改善营养及适口性,这些特点是其他方法所不能比拟的。因此,微生物发酵脱毒法具有较大的发展潜力,开发利用前景广阔。以棉酚为唯一碳源,从棉田土壤中分离筛选对棉酚具有降解作用的菌株,得到具有较高降解活性的菌株M-4,其对棉酚降解率达到94.74%,对该菌株进行了菌落、菌体、芽孢形态观察,生理生化鉴定和16S rDNA系统发育树的构建,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。为了提高棉酚降解菌发酵液菌体浓度,对M-4菌株的发酵条件进行了优化,通过单因素试验和正交试验发现蔗糖为最佳碳源,蛋白胨为最佳氮源,MgSO4·7H2O为最佳无机盐,确定M-4的最佳发酵条件为:蔗糖5.0 g,蛋白胨10.0 g,MnSO4·H2O 1.0 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,NaH2PO4·H2O 0.5 g,CaCl·2H2O 0.1 g,K2HPO4 0.5 g, FeCl3 0.2 g,初始pH 8.0,三角瓶装液量为120 mL/250 mL,接种量10%,摇瓶转速220 r/min,发酵温度30℃。培养条件优化后菌体浓度显著提高:而芽孢率在95%以上,为该菌的进一步研究与应用奠定了基础。对接菌并发酵后的棉籽饼进行有关营养成分的测定,意在得出菌株对棉籽饼营养成分的改变,从而更好的了解棉籽饼的利用价值。将M-4菌株发酵液进行了小白鼠饲喂的安全性试验,未发现小白鼠脏器、肠道的任何病变,证明此菌株为枯草芽孢杆菌安全菌株。为了进一步研究棉籽饼的脱毒效果,用M-4菌株发酵的棉籽饼饲喂小鼠和肉鸡,发现饲喂后小鼠和肉鸡增重明显且脏器无明显病变,说明菌株M-4的处理已经大大降低了棉酚对实验动物的影响。
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