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柑橘病毒病害以及病毒类似病害主要包括衰退病、碎叶病、黄龙病和裂皮病等,本课题主要以柑橘黄龙病,衰退病、碎叶病作为研究对象。由于病毒病害可通过昆虫媒介或者嫁接等方式进行远距离,大范围的传播,已造成严重的经济损失,而现阶段缺少有效的防治方法。因此研究有效的脱毒方法和抗病毒试剂,并结合现代的分子检测手段对柑橘病害进行检测和治疗具有重要的经济价值。在细菌中编码一种膜外蛋白(OMPs),被公认为是研究种间和种内变异的候选蛋白,OMPs在许多革兰氏阴性细菌致病机理中起着关键作用,它们参于细菌的适应性反应,同时因为细菌的外膜极易被宿主的免疫系统识别为外源物质,OMP蛋白具有制备为免疫疫苗的可能。本课题的研究目的是根据已公布的柑橘黄龙病菌的omp基因序列,对该基因进行克隆和表达,得到纯化的目的蛋白后,制备针对柑橘黄龙病菌的单克隆抗体。现阶段已取得的研究进展如下：1.对桃叶橙带毒苗采用中药制剂与隔热间37℃恒温热处理50d(10.11.3—11.1.20)后,病毒浓度降低。药剂处理设为3组：i.穿心莲单独处理,2g/株；ii.黄柏单独处理,2g/株；iii.黄柏与穿心莲各1g/株结合处理。每5d根灌一次。继续相同方法处理50d(11.4.19—6.9)后,碎叶病检出率为8.7%。2.带毒黔阳无核椪柑和福本脐橙在药剂处理和变温热处理(39℃恒温2d,35℃恒温2d)结合处理50d(2011.10.18—12.7)后,能够有效脱毒碎叶病,脱毒率为100%。而黔阳无核椪柑的死亡率过高,存活率为11.1%。3.对疑似带黄龙病菌的柑橘样叶以及长春花样叶进行病原检测,并利用提取的长春花样叶的DNA基因组成功克隆到omp基因,基因片段大小为2346bp。4.构建原核表达重组质粒pET-22b-omp,但目的蛋白并无表达量,只观察到截短蛋白的表达。对蛋白结构和功能进行分析预测,对其C端表面抗原区域的561-781aa进行扩增,对应的序列片段命名为ompC。成功克隆该片段,构建重组表达载体后,在表达菌株BL21(DE3)plysS得到较高的截短蛋白表达量。筛选到最佳的诱导表达条件,IPTG浓度为0.6mM,28℃下诱导表达8h～16h,截短蛋白为部分可溶。