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艾滋病严重威胁着人类的健康,目前临床上尚缺少有效、安全、低毒的抗HIV药物。为了从中药中寻找具有抑制HIV活性的天然有效成分,本课题组在前期工作中,采用HIV的5′端LTR转染的BF-24细胞为活性筛选模型,以牙龈卟啉单胞菌为激活子,以报告基因氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)的表达量为评价指标,有针对性的对大量中药进行抑制HIV活性的筛选研究,结果表明:中药桑白皮65%的乙醇粗提物具有较强的下调控HIV-1LTR的作用。本课题组对桑白皮抗HIV活性成分进行了系统地追踪分离,希望发现具有下调控HIV-1LTR作用的有效部位和有效成分,阐明中药桑白皮具有抗HIV活性的物质基础,为桑白皮的进一步的开发利用及抗HIV新药的研发提供基础资料。 取桑白皮药材粉碎,用65%的乙醇提取得到粗浸膏,按极性大小划分成石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位、水部位。各提取部位药理活性筛选结果表明,乙酸乙酯部位显示较强的抗HIV活性,为桑白皮的有效部位。对乙酸乙酯部位进行系统的分离纯化,得到了9个化合物。根据其理化性质和波谱数据鉴定为三十三烷(tritriacontaneⅠ)、棕榈酸(hexadecanoicacidⅡ)、β-谷甾醇(β-sitosterolⅢ)、桦木酸(betulicacidⅣ)、齐墩果酸(oleanolicacidⅤ)、东莨菪内酯(scopoletinⅥ)、4′,5,7-三甲基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-黄酮(4′,5,7-trihydroxy-8-(3,3-dimethylallyl)-flavoneⅦ)、摩鲁新L(morusigninLⅧ)和胡萝卜苷(daucosterolⅨ),其中棕榈酸(hexadecanoicacidⅡ)为首次从桑白皮中分出。4′,5,7-三甲基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-黄酮(4′,5,7-trihydroxy-8-(3,3-dimethylallyl)-flavoneⅦ)为首次从桑科植物中分出。 本文建立了应用高效液相测定桑白皮中摩鲁新L含量的方法。色谱柱条件为:AlltimaC18色谱柱(4.6mmx250mm,5μm),流动相乙腈-水-乙酸(50:50:0.1),检测波长270nm。标准曲线显示,摩鲁新L在3.6—18μg/mL范围内呈良好的线性关系,回归方程为y=114248x-20613,R2=0.9984。样品平均回收率为100.1%,RSD为1.4%。 目前桑白皮的质量标准尚不完善,为充分开发利用桑白皮药材,有必要对其质量标准进行研究。因为桑白皮中含有较多的黄酮类化合物,并且此类化合物也是桑白皮的有效成分之一,为完善桑白皮的质量标准,本文建立了以摩鲁新L为对照品,采用AlCl3体系显色测定桑白皮中总黄酮含量的方法,其回归方程为A=0.0109ρ-0.0074,相关系数R2=0.9996,RSD为1.61%,平均回收率为99.5%。在此方法的基础上我们完成了桑白皮的质量标准草案。