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目的:分析临床分离肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2的耐药特征、毒力特征、全基因组序列和克隆分型。比较5种中药单体对菌株XJ-K1和XJ-K2的体外抗菌活性,并分析抗菌活性较好的中药单体与抗生素联合用药效果。为临床进一步了解肺炎克雷伯菌特性,及正确使用抗生素和控制医院感染提供科学依据,同时也为寻找新的治疗方案提供思路。方法:1.收集复旦大学附属华山医院北院分离的肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2,采用微量肉汤稀释法测定26种抗菌药物对其的最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration,MIC）。2.采用拉丝实验（String test）判定菌株XJ-K1和XJ-K2的高粘液表型。3.采用PCR（Polymerase chain reaction）)对菌株XJ-K1和XJ-K2进行耐药基因和毒力基因扩增。4.采用多位点序列分型技术（Multilocus sequence typing,MLST）分析菌株XJ-K1和XJ-K2的ST型别。5.采用Illumina HiSeq 4000平台和PacBio RSII平台对菌株XJ-K1和XJ-K2进行全基因组测序,原始序列进行基因组组装和基因预测,并运用多种生物信息学分析方法对基因组信息进行分析。6.采用微量肉汤稀释法测定5种中药单体（花旗松素、苦参碱、绿原酸、木犀草素和秦皮乙素）对菌株XJ-K1和XJ-K2的最低抑菌浓度。7.采用棋盘稀释法进行中药单体秦皮乙素与6种抗菌药物的体外联合用药实验,并计算部分抑菌浓度指数值。结果:1.肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2对除多粘菌素B以外的其它测试抗菌药物均耐药。2.拉丝实验结果显示菌株XJ-K1和XJ-K2均为高粘液菌株。3.耐药基因blaTEM-1、blaKPC、blaSHV、rmtB在菌株XJ-K1和XJ-K2均检出;而耐药基因qnrS和tet（A）仅在菌株XJ-K2中被检出。在两菌株的gyrA和parC基因中均发现已知的与喹诺酮耐药相关的点突变。4.菌株XJ-K1和XJ-K2均携带着高毒力相关基因iucABCD、iutA、rmpA和rmpA2。5.多位点序列分型（MLST）显示菌株XJ-K1和XJ-K2均为ST11型。6.全基因组测序分析显示,（1）菌株XJ-K1基因组包括一个染色体和三种质粒,染色体大小为5,454,121bp,三种质粒大小分别为207,409bp（pXJ-K1-p1）、130,628bp（pXJ-K1-p2）和99,048bp（pXJ-K1-KPC-2）。菌株XJ-K1基因组编码13个耐药基因,其中染色体编码3个耐药基因（fosA、aadA2和sul1）,pXJ-K1-p2编码4个耐药基因（dfrA12、mph（A）、aadA2和sul1）,pXJ-K1-KPC-2编码6个耐药基因(blaTEM-1、blaCTX-M-65、blaSHV-12、blaKPC-2、rmtB和fosA3)。（2）菌株XJ-K2基因组同样也包括一个染色体和三种质粒,染色体大小为5,503,278bp,三种质粒大小分别为219,775bp（pXJ-K2-p1）、96030bp（pXJ-K2-KPC-2）和84855bp（pXJ-K2-p3）。菌株XJ-K2基因组编码13个耐药基因,其中染色体编码3个耐药基因(fosA、mdf（A）和blaSHV-182),pXJ-K2-KPC-2编码5个耐药基因(blaTEM-1、blaCTX-M-65、blaKPC-2、rmtB和fosA3),pXJ-K2-p3编码5个耐药基因(blaLAP-2、dfrA14、qnrS1、sul2和tet（A）-variant)。（3）菌株XJ-K1和XJ-K2的染色体和pLVPK-like毒力质粒分别编码多个毒力基因,其中高毒力基因（iucABCD、iutA、rmpA、rmpA2和iroN）均位于毒力质粒上。（4）耐药基因遗传环境分析显示,耐药基因同插入序列和整合子形成复杂的耐药区域,质粒pXJ-K1-p2和pXJ-K2-p3中分别存在1型整合子In191和In27。（5）进化分析显示,菌株XJ-K1和XJ-K2亲缘关系较近。7.5种中药单体中秦皮乙素对菌株XJ-K1和XJ-K2的体外抗菌活性最好,MIC值均为512μg/mL。8.中药单体秦皮乙素与呋喃妥因体外联合用药时,呋喃妥因对菌株XJ-K1和XJ-K2的MIC值能降低48倍,FICI值小于0.05,表现为协同作用。结论:1.菌株XJ-K1和XJ-K2为ST11型广泛耐药高毒力肺炎克雷伯菌。2.菌株XJ-K1和XJ-K2携带的大量耐药基因和毒力基因可能是导致菌株广泛耐药并表现为高毒力的主要原因。3.在体外,中药单体秦皮乙素对广泛耐药高毒力肺炎克雷伯菌有一定抗菌活性,秦皮乙素与呋喃妥因联合用药可增加广泛耐药高毒力肺炎克雷伯菌对呋喃妥因的敏感性,具有药物间的协同作用。