论文部分内容阅读
[目的]探讨大豆异黄酮调控PPARγ信号通路诱导BMSCs的成骨分化能力,治疗激素性股骨头坏死的效果及作用机制。[方法]1、采用肌注地塞米松磷酸钠注射液的方法,建立兔早期激素性股骨头坏死模型,随后进行行为观察,6周后进行MRI和组织学检查。2、全骨髓贴壁法分离兔BMSCs细胞,并进行培养、鉴定及诱导分化.3、MMT法测定BMSCs增殖能力.4、采用RT-PCR检测Runx2, Col-1, Osteocalcin mRNA的表达。5、试剂盒测定组织和细胞内ALP和TG活性。6、Western blot法检测BMSCs中PPARγ蛋白的表达。[结果]1、成功建立兔早期激素性股骨头坏死模型。兔肌注地塞米松磷酸钠注射液,6周后发现模型组双侧股骨头形态欠规则,股骨头内可见斑片状不规则异常影像,软骨下骨缺血、坏死、囊变,骨小梁稀疏；双侧髋关节对称,关节间隙正常；而对照组双侧股骨头形态规则,股骨头内未见异常信号,骨小梁排列正常,双侧髋关节间隙正常。模型组软骨下骨板薄,毛细血管网稀疏;骨小梁变细和稀疏,部分断裂；骨细胞核固缩,空骨陷窝明显增多；骨髓腔内脂肪细胞增多、增大；红骨髓受压变少.对照组软骨下骨板厚而连续,毛细血管网丰富；股骨头内骨小梁粗大,骨陷窝内骨细胞形态正常；股骨头骨髓腔内脂肪细胞正常,红细胞丰富,形态正常。2、骨髓间充质干细胞赔养2天后可见大量圆形细胞,仅可见少量梭形细胞。5天后,贴壁细胞具有长梭形的形态,能够克隆性增值生长,细胞成菊花状或旋涡状形状来排列。8-10天能够有70-80%的融合率,细胞仍保持长梭形。骨髓间充质干细胞细胞核染色深蓝色。取第3代骨髓间充质干细胞进行表型鉴定,流式细胞仪分析检测结果表明骨髓间充质干细胞表面抗原标志CD44、CD90呈阳性,而CD34、CD45呈阴性。骨髓间充质干细胞经成骨诱导后,可见明显的钙化结节。经成软骨诱导后,有软骨基质形成。3、大豆异黄酮组处理8周后,兔早期激素股骨头坏死骨组织中Runx2, Col-1,OC mRNA表达较模型组升高,PPARγ mRNA表达降低,组间比较差异显著,接近空白对照组。4、大豆异黄酮促进骨髓间充质干细胞的细胞增殖,并有时间和剂量依赖性。20μM大豆异黄酮2、3天时,骨髓间充质干细胞的增殖明显增加。5、大豆异黄酮可增加骨髓间充质干细胞中的Runx2、Col-1和OC mRNA的表达,增加ALP的活性,降低TG活性。同时,20μM大豆异黄酮明显抑制了PPARγ的激活。6、与20μM大豆异黄酮处理组比较,PPARγ激动剂Rosiglitazone明显抑制了大豆异黄酮诱导的骨髓间充质干细胞增殖。7. PPARγ激动剂处理组骨髓间充质干细胞中的Runx2,Col-1和OC mRNA表达较大豆异黄酮处理组降低,ALP活性降低,TG活性增加。[结论]大豆异黄酮通过调控PPARγ信号通路,调节骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,从而起到治疗激素性股骨头坏死的作用。