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二苯并呋喃（DBF）作为二噁英的模式化合物,具有致癌、致畸、致突变的毒性,是持久性的环境污染物。目前微生物主要通过两种途径降解DBF:一是利用其为唯一碳源生长的有角度双加氧途径;二是先利用联苯或萘等生长后再共代谢降解的侧面双加氧途径。与有角度双加氧相比,侧面双加氧途径未被系统揭示。虽然已发现了该代谢途径中的一些新产物,但整个侧面双加氧降解途径还有待进一步完善,且其相关降解基因还有待进一步挖掘。本研究根据Pseudomonas putida B6-2利用联苯生长后,能经侧面双加氧途径共代谢降解DBF并积累中间代谢产物2-hydroxy-4-（3’-oxo-3’H-benzofuran-2’-yliden）but-2-enoic acid（HOBB）的特性。对培养基、反应pH、菌体密度、底物初始浓度、萃取条件及萃取剂进行优化后,菌株B6-2在含有联苯的LB培养基培养后,于OD600=5,pH=7,DBF初始浓度为0.5 mM的条件下进行菌体使用两次的分批发酵反应。经乙酸乙酯“中性-酸性”萃取后,进一步浓缩、纯化,最终由22.49±0.74 mg的DBF转化得到了13.58±0.31 mg的HOBB,达到了60.4%（w/w）的高产量。纯化后的HOBB为黄色粉末,并利用LC-MS,GC-MS和NMR等技术进行了鉴定。为寻找HOBB的下游降解基因,首先通过比较联苯代谢途径,推测乙烯丙酮酸水合酶（vinylpyruvate hydratase,VPH）能直接参与HOBB的降解。对B6-2中相关基因进行敲除并通过大肠杆菌进行体外功能验证,均证明VPH不能作用于HOBB。随后,在菲降解途径中找到了与HOBB分子结构相似的底物4-[1-hydroxy（2-naphthyl）]-2-oxobut-3-enoic acid,并对其水合醛缩酶基因phdG进行研究。通过大肠杆菌的体外功能验证,发现PhdG对HOBB具有降解效果;利用pET28a表达该蛋白,粗酶液反应显示其对HOBB存在微弱降解,但蛋白表达、纯化条件还需摸索。为进一步验证PhdG蛋白功能,尝试将phdG基因插入B6-2基因组,目前已插入成功,有待功能验证。本研究通过积累制备DBF中间代谢产物HOBB,并以其为底物对推测的降解基因进行了功能验证及蛋白表达、纯化,为进一步揭示侧面双加氧途径降解机理,以及寻找HOBB的降解的外源基因、加快DBF的降解速度等方面提供了新思路。