人β防御素在牙髓炎抗炎反应中的作用与机制

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目的:在体外原核细胞中表达纯化人β防御素110(humanβdefensin,HBD110),并在真核细胞中过表达HBD110;研究HBD110在人牙髓细胞及TH1细胞中对炎症因子的调节作用;探讨HBD110对常见致病菌及牙髓炎致病菌的抗菌作用,为阐明HBD110的抗炎抗菌机制提供理论基础。方法:利用Intein介导的IMPACT-pTWIN1自剪切体系在大肠杆菌中表达纯化HBD110多肽,通过构建HBD110过表达载体在HEK293T细胞的上清中过表达HBD110;运用过表达HBD110的HEK293T细胞上清预处理人牙髓细胞及TH1细胞,并用LPS或PGN刺激上述细胞,采用实时定量荧光PCR方法检测TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6、CXCL-11、TLR2等炎症相关因子及HBD2的表达水平;同时采用双荧光素酶报道基因系统检测HBD110预处理后细菌脂多糖(LPS)刺激下RAW264.7细胞中NF-κB通路的活性;采用菌落形成单位(CFU)法检测HBD110-N端短肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、具核梭杆菌及粪肠球菌的抗菌效率。结果:在体外利用原核表达系统表达纯化出HBD110多肽,运用真核过表达系统在HEK293T细胞中过表达出HBD110多肽;当用1μg/mL LPS或2μg/mL PGN刺激人牙髓细胞及TH1细胞时,HBD110可以调节上述细胞中炎症因子的表达,并通过炎症因子调节HBD2的表达,HBD110对炎症反应的调节可能是通过抑制NF-κB通路实现的;证实HBD110-N端短肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、具核梭杆菌及粪肠球菌有一定的抗菌作用。结论:人β防御素110能抑制人牙髓细胞及TH1细胞炎症反应,对牙髓炎致病菌有一定的抗菌作用。
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