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目的本研究的目的是探讨细胞骨架调节蛋白Diaphanous related formin 3(DIAPH3)在结直肠癌中的表达水平与结直肠癌临床进展及预后的相关性,并且进一步明确DIAPH3对结直肠癌细胞株的增殖迁移能力的影响及调节机制。方法1.收集1 18例结直肠癌患者癌组织及配对的癌旁正常黏膜组织,利用组织免疫组化检测各个组织中DIAPH3的表达量,探索DIAPH3在结直肠癌表达水平与患者临床病理特征的相关性。同时利用TCGA数据库分析DIAPH3表达水平对结直肠癌患者的预后影响。2.运用Western Blot检测不同结直肠癌细胞株与正常结肠粘膜上皮细胞株中DIAPH3表达水平的差异。选择表达量较高的结直肠癌细胞株进行慢病毒转染抑制DIAPH3的表达,qPCR与Western Blot验证转染效率,选择最有效的转染片段的结直肠癌细胞株进行细胞增殖以及迁移能力的检测。3.将转染细胞分为空白对照组si-NC与转染组si-DIAPH3,分别利用CCK-8,克隆形成检测DIAPH3对结直肠癌细胞株增殖能力的影响;同时利用细胞划痕愈合实验及Transwell方法检测其对结直肠癌细胞株的迁移能力影响。4.利用Western blot验证DIAPH3对结直肠癌中增殖转移关键通路EGFR/Src的调控作用,并通过使用DIAPH3激活剂IMM-01以及通路抑制剂吉非替尼来验证其作用。结果1.DIAPH3在结直肠癌组织中的表达水平与肿瘤临床分期,局部浸润与远处转移相关,结果具有统计学意义(P<0.05),并且生物信息学网站的生存曲线分析结果显示在结直肠癌中DIAPH3的表达下降提示预后不良(P<0.05)。2.Western blot 提示在结直肠癌细胞株(SW480、HCT116、HCT8、KM12、RKO、LoVo)中DIAPH3的表达水平低于正常结肠黏膜细胞NCM460;免疫组化提示结直肠癌组织中DIAPH3的表达水平低于癌旁正常结肠粘膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.选择结直肠癌细胞株的中DIAPH3的表达水平较高的SW480及KM12进行转染,qPCR和Western Blot提示片段sh-1转染效率最高,随后细胞实验结果提示DIAPH3受抑制后,结直肠细胞株KM12与SW480细胞的增殖活性及迁移能力均较对照组增强,差异有统计学意义(P<0.05)。4.western blot结果表明,当DIAPH3受抑制时,EGFR/Src通路活性增强,且当使用DIAPH3激活剂IMM-01与EGFR通路抑制剂时,细胞的增殖及迁移活性明显降低。差异有统计学意义(P<0.05)。结论DIAPH3低表达与肿瘤进展和不良预后相关,且在结直肠癌细胞株中干扰DIAPH3合成可以激活EGFR/Src通路,从而增强结直肠细胞株的增殖、迁移能力。