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根据己报道的文章,人脂肪肉瘤细胞系SW872在两个月内无法在裸鼠体内成瘤[1],而在SCID小鼠体内成瘤率也极低。为提高SW872细胞的恶性程度,寻找到一个体内不断恶化的脂肪肉瘤模型,本实验室通过有文献报道的体内反复接种的方法,分离到形态单一、倍增时间稳定、恶性程度高的人脂肪肉瘤细胞亚系SW872-S[2]。论文第一部分对脂肪肉瘤细胞SW872及其亚系SW872-S进行了一系列的比较,发现硼替佐米诱导脂肪肉瘤细胞亚系SW872-S更明显的线粒体通路的凋亡：硼替佐米处理后的SW872和SW872-S引发JNK而不是p38的磷酸化,从而引发JNK下游的Bax与14-4-3分开,从胞浆中转座到线粒体上,引起细胞色素c的释放而启动线粒体凋亡通路。我们发现,蛋白质合成抑制剂放线菌酮几乎可完全逆转硼替佐米引起的凋亡。蛋白酶体活性测定结果显示,SW872及其亚系SW872-S的蛋白酶体糜蛋白酶样活性并无明显区别。我们猜测,在相同剂量的硼替佐米作用下,SW872和SW872-S的蛋白酶体降解速度受到同样的抑制,SW872-S却诱发了更为明显的凋亡现象,这是否是因为SW872-S拥有更为旺盛的基因转录及蛋白表达系统呢?硼替佐米处理的SW872-S因细胞内堆积更多的需要降解的蛋白却无法及时降解而引发凋亡?我们检测了蛋白翻译调控的关键蛋白,结果证明我们的假想是成立的,SW872-S细胞较SW872拥有更旺盛的蛋白合成系统。论文第二部分主要考察了P-糖蛋白在SW872和SW872-S细胞耐受硼替佐米药物过程中所发挥的作用及其潜在的机制。研究发现,在SW872和SW872-S细胞与硼替佐米高剂量共同孵育情况下,P-糖蛋白的表达下调；而低剂量共同孵育的情况下,SW872的P-糖蛋白表达量呈现上调的趋势,而SW872-S的P-糖蛋白表达量继续呈现下调的趋势,提示硼替佐米可能在一定浓度下剂量依赖性上调SW872细胞的P-糖蛋白表达,一旦超过这个浓度范围,硼替佐米反而剂量依赖性下调SW872细胞的P-糖蛋白表达,而促进细胞的凋亡。有报导称硼替佐米可通过下调磷酸化AKT或者下调磷酸化IκBα来诱导细胞的凋亡,而我们研究发现,在SW872-S细胞中硼替佐米并不引起PI3K/AKT通路的阻滞,反而触发NF-κB信号通路的激活,JNK抑制剂SP600125可部分逆转硼替佐米对SW872-S细胞的P-糖蛋白的下调作用以及NF--κB通路的激活,进而下调硼替佐米对SW872-S细胞的促凋亡作用。用硼替佐米及JNK抑制剂SP600125处理人结肠癌细胞系SW480和SW620细胞,我们亦得到同样的结果。而进一步的研究发现,硼替佐米可剂量依赖性地下调SW620细胞中IKBα蛋白的表达量,从而诱导NF-κB经典通路的激活。论文第三部分通过体内给药模型,我们探讨了硼替佐米对人脂肪肉瘤细胞系SW872及其亚系SW872-S体内增殖的影响。小鼠脂肪肉瘤皮下移植模型表明：0.25mg/kg/d硼替佐米可以明显抑制SW872及SW872-S移植瘤的生长,对移植瘤组织进行HE染色及TUNEL染色发现,硼替佐米治疗组肿瘤坏死程度及凋亡程度均明显高于PBS对照组。而肿瘤组织蛋白免疫印记分析结果显示,硼替佐米同样引起SW872和SW872-S移植瘤组织的凋亡和NF-κB通路的激活,体内实验的结果进一步证实了体外的作用机制。综上所述,本研究以蛋白酶体抑制剂硼替佐米入手,比较硼替佐米引起人脂肪肉瘤细胞系SW872及其高恶性亚系SW872-S的不同作用,发现硼替佐米诱导高恶性脂肪肉瘤细胞亚系SW872-S细胞更明显的线粒体依赖性的凋亡。相较于脂肪肉瘤细胞SW872, SW872-S细胞拥有更为旺盛的蛋白合成系统,硼替佐米通过抑制蛋白酶体活性显著提高SW872-S细胞内的ROS水平,持续激活了JNKMAPK通路,最终导致了线粒体途径的凋亡。同时活化的JNK可以磷酸化了IκBα,下调IκBα蛋白表达,进而使IκBa与NF-κB分开,激活NF-κB信号通路。