卵巢癌在妇科肿瘤中的发病率位居第三位，死亡率位居首位。原发性卵巢癌发病隐匿，早期诊断困难，80％患者就诊时已为晚期，尽管经过手术和化疗可达到完全缓解，但多数晚期患者仍会在短期内复发，最终衍变为化疗耐药而死亡。其总体5年生存率在仅30%左右。因此寻找高效低毒的分子靶向药物，提高卵巢癌治疗疗效，降低卵巢癌死亡率是亟待解决的重大问题。　　PI3K通路是调节细胞生长，增殖和生存能力等重要细胞功能的信号通路。在体内和体外研究表明，一些 PI3K抑制剂在卵巢癌中无论是作为单药还是和细胞毒性抗癌试剂联合使用均表现出显著的抗肿瘤作用。BKM120是一种泛 PI3K抑制剂，在I/II期临床试验结果表明，BKM120对PI3K通路正常或异常激活的各种肿瘤具有抗肿瘤的治疗效应。在细胞系和肿瘤异种移植模型中也显示出抗增殖，促凋亡的活性。另外，抑制PI3K通路影响DNA双链损伤修复的同源重组过程。　　多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂是被 FDA批准的第一个作为治疗BRCA突变的晚期卵巢癌靶向治疗药物。PARP是 DNA单链断裂（SSB）修复的关键分子之一，参与基因组的完整性的监控和修复。BRCA蛋白是 DNA双链断裂（DSB）后进行同源重组（HR）过程中的关键蛋白。BRCA1通过介导 HR修复过程具抑癌活性。BRCA基因缺陷的细胞表现出对 PARP抑制高度敏感性，引起基因组不稳定和细胞凋亡。PARP抑制剂Olaparib和PI3K抑制剂BKM120联合应用对 BRCA1基因缺陷或正常的乳腺癌及 PTEN和 P53缺陷的激素不敏感型前列腺癌具有协同抗癌作用。有关BKM120和Olaparib联合应用治疗卵巢癌疗效及其作用机制并不十分清楚，本研究，将探讨该联合治疗方案在体外和体内治疗卵巢癌的潜在机制，明确该联合治疗方案的适用人群。　　目的：　　多种信号通路的异常激活影响着卵巢癌的发生发展，其中PI3K信号通路40%卵巢癌病例中有异常改变。PI3K和PARP抑制联合治疗方案已以临床前实验被证明在BRCA基因表达正常的乳腺癌和前列腺癌有较好疗效。然而，关于该联合治疗方案对于卵巢癌的疗效是有限的。本研究分别对同时抑制PI3K通路和PARP对PIK3CA突变的卵巢癌细胞和PIK3CA野生型卵巢癌的抗癌的疗效和机制进行研究。　　方法：　　用PI3K抑制剂BKM120和PARP抑制剂Olaparib单独或联合处理11种卵巢癌细胞系，采用克隆形成实验观察对卵巢癌细胞的抑制效率，分析携带不同基因特点的卵巢癌细胞之间存在的差异。　　（1）选择携带PIK3CA突变的卵巢癌细胞系SKOV3、HEYA8、IGROV1和EFO27细胞系；采用CCK-8分析方法估算BKM120和Olaparib单独或联合应用对这4种卵巢癌细胞活性影响；利用彗星实验、免疫荧光和免疫印迹法（Western Blot）实验观察BKM120和Olaparib单独或联合应用对4种卵巢癌细胞DNA损伤和修复过程的影响；利用流式细胞术观察这种治疗方案对细胞凋亡的影响；Western Blot技术探讨这种治疗方案对PI3K/AKT/mTOR通路及凋亡的相关蛋白表达量影响；利用划痕实验、迁移和侵袭实验观察这种治疗方案对卵巢癌的细胞迁移和侵袭生物活性的影响；利用real-time RT-PCR技术检测BRCA1/2表达情况；将用Luciferase标记的SKOV3细胞行腹腔注射制备卵巢癌腹腔播散模型，在此模型的基础上用BKM120和Olaparib单独或联合治疗，用免疫组织化学技术观察PI3K/AKT/mTOR通路、凋亡的相关及BRCA1等蛋白表达情况。　　（2）用BKM120和/或PARP抑制剂Olaparib处理3种携带野生型PIK3CA基因的卵巢癌细胞株，用CCK8方法、免疫印迹法，彗星试验，流式细胞术、免疫荧光技术对观察药物对细胞活性、增殖和DNA损伤修复的影响。用联合指数（combination index,CI）分析BKM120和Olaparib对卵巢癌细胞的协同抑制作用。建立人类卵巢癌组织体外培养模型，给予BKM120和/或PARP抑制剂Olaparib处理后，用免疫组织化学技术观察PI3K/AKT/mTOR通路、凋亡的相关及 BRCA1等蛋白表达情况。　　结果：　　我们结合文献及数据库有关这11种卵巢癌细胞的全基因组测序结果，选定与 PI3K信号通路相关的基因（即K-ras、p53、PIK3CA、PTEN和 EGFR等）进行分析，结果提示不能确定某一个单一突变基因与肿瘤细胞对 BKM120治疗反应之间具有明显的关联性。因些，我们分别选择 PIK3CA突变和野生型卵巢癌细胞系做后续实验。　　（1）PI3K抑制剂BKM120有效抑制卵巢癌细胞的增殖，BKM120可导致γH2AX增加，使同源重组修复蛋白RAD51表达量降。联合抑制PI3K和PARP的有效协同抑制携带PIK3CA突变卵巢癌细胞（包括SKOV3、HEYA8和IGROV1）的增殖、存活和迁移。与PARP或PI3K抑制剂单独处理相比，联合用药处理可引起更强的DNA损伤反应、更大幅度降低PI3K/mTOR信号及ERK的磷酸化水平升高。值得注意的是，对卵巢癌细胞进行PI3K和PARP同时抑制可以显著降低BRCA1/2表达。此外，该联合治疗方案的效果在腹腔内播散移植瘤小鼠模型中被证实，抑制PI3K/AKT信号使SKOV3卵巢癌细胞BRCA1的表达显著降低，减少肿瘤负荷。BKM120联合Olaparib处理 EFO27细胞并没有得到相同结果。与其他三种卵巢癌细胞相比，EFO27细胞对BKM120和Olaparib联合治疗方案表现耐药。　　（2）联合抑制PI3K通路和PARP可有效协同抑制PIK3CA野生型卵巢癌细胞株（OVCA433，OVCAR5，和OVCAR8）的增殖。BKM120联合Olaparib诱导PIK3CA野生型卵巢癌细胞凋亡。BKM120联合Olaparib诱导PIK3CA野生型卵巢癌细胞的 pS6RP大副度降低和增强DNA损伤反应。值得注意的是，双重抑制 PI3K通路和 PARP可使这些卵巢癌细胞的BRCA1/2表达显著降低。此外，对人类卵巢癌的移植体体外培养，暴露BKM120和Olaparib后可显著抑制癌细胞的增殖、促进癌细胞凋亡，并伴随BRCA1表达降低。　　结论：　　（1）联合抑制PI3K通路和PARP是治疗PIK3CA突变卵巢癌有效方案；同时，PI3K抑制剂使BRCA下调可以作为评估联合使用PARP抑制是否会有效的生物标记物。　　（2）联合抑制PI3K通路和PARP可有效治疗PIK3CA野生型卵巢癌，而不依赖于BRCA1/2基因状态。提示，BKM120联合Olaparib应用可有效治疗的卵巢癌症类型不限于那些携带BRCA基因和/或PIK3CA基因异常的肿瘤患者。