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甲基转移酶样21(Methyltransferase like 21,METTL21)是甲基转移酶超家族的一类远亲成员,包括METTL21A、METTL21B、METTL21C和METTL21D四个成员。其中METTL21C在动物机体各个组织中均表达,尤其是骨骼肌组织中特异性高表达。研究发现,METTL21C能够促进小鼠C2C12细胞的成肌分化,抑制肌肉萎缩,但其在家禽骨骼肌中的功能研究相对较少。因此,本论文旨在探究METTL21C影响禽类骨骼肌生长发育机制,为改善家禽肌肉品质、提高生产性能提供参考价值,也为运动科学、肌肉疾病及代谢稳态等医学问题奠定理论基础。本研究以略阳乌鸡为研究对象,采用酶消化法分离鸡原代骨骼肌卫星细胞,并以此为细胞模型,探究METTL21C对成肌分化的影响;通过液相色谱质谱检测和免疫共沉淀技术鉴定METTL21C的互作蛋白,验证METTL21C与Hsc70结合在成肌分化过程中的作用,最终系统阐述METTL21C影响家禽骨骼肌生长发育的分子机理。本研究主要获得实验结果如下:1.分析略阳乌鸡腿肌组织转录组测序数据,结合文献查阅,发现甲基转移酶METTL21C基因可能影响禽类骨骼肌的生长发育;进一步检测METTL21C基因表达规律,结果显示METTL21C在略阳乌鸡各个组织中均表达,其中心肌中表达量最高,其次是骨骼肌;随着动物日龄增长,METTL21C在骨骼肌组织中的表达呈升高趋势。2.采用酶消化法分离鸡原代骨骼肌卫星细胞,检测肌卫星细胞标志基因Pax7和MyoG的表达水平,最终确认分离获得鸡原代骨骼肌卫星细胞,为后续实验提供细胞模型。3.成功构建METTL21C超表达载体,将其转染至鸡骨骼肌卫星细胞中,结果发现肌肉发育相关基因的表达水平随之升高,表明METTL21C具有促进家禽骨骼肌生长发育的作用。4.基于LC-MS/MS质谱检测技术鉴定METTL21C的互作蛋白,筛选Hsc70为研究对象,采用Co-IP技术验证METTL21C和Hsc70存在互作效应。进一步探究METTL21C和Hsc70互作对肌肉发育的影响,发现单独超表达Hsc70,肌肉发育相关基因表达降低,表明其具有抑制成肌分化的能力,但METTL21C和Hsc70结合减弱了Hsc70抑制成肌分化的作用。5.构建Hsc70基因的K561位点突变载体,通过Co-IP技术验证突变后METTL21C与Hsc70之间的互作关系。结果显示K561位点突变后,METTL21C与Hsc70没有结合,说明K561为METTL21C与Hsc70的结合位点,由此表明,METTL21C通过与Hsc70的K561位点结合参与调控家禽骨骼肌生长发育过程。