血清蛋白质组学分析方法初步筛选人胃癌相关抗原

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目的:利用血清蛋白质组分析方法,建立人胃癌组织蛋白质双向凝胶电泳图谱以及分别与胃癌患者血清和非癌人群血清的Western blot反应图谱,初步筛选与鉴定差异反应的蛋白质点,寻找胃癌相关抗原。 方法:利用固相pH梯度(Immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)方法,分离人胃癌组织的总蛋白质;同一个样品跑三块凝胶,一块考马斯亮染显色作为平行胶,另二块分别以胃癌患者自身血清和非癌人群血清作一抗进行Western blot分析,获得Western blot反应图谱;用人工与计算机相结合的方法对图像进行比较分析,识别差异反应的蛋白质点,然后与平行胶比较,找出匹配的差异反应蛋白质点;对差异反应的蛋白质点应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行质谱分析鉴定,获得相应的肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),数据库搜索鉴定出差异反应的蛋白质。 结果:获得分辨率较高且匹配性较好的人胃癌组织总蛋白2-DE图谱,10块胶的平均点数为827±39,平均匹配点数为732±32,平均匹配率为88.5%;人胃癌组织2-DE后分别与胃癌患者自身血清和非癌人群血清进行免疫印迹,获得分辨率较高的Western blot反应图谱;图像分析找出差异反应的蛋白质点16个,质谱鉴定15个蛋白质,分别为:核内不均一核糖核蛋白K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNP K)、核内不均一核糖核蛋白H1(hnRNP H1)、核内不均一核糖核蛋白H2(hnRNP H2)、细胞骨架蛋白18(cytokeratin 18,CK18)、Fkbp52热休克蛋白90复合物(crystal structure of Fkbp52 c-terminal domain complex with the c-terminal peptide meevd of Hsp90)、血清维生素D结合蛋白前体(serum vitamin D-binding protein precursor,DBP)、硒结合蛋白1(selenium binding protein 1,SBP1)、真核细胞翻译延长因子1(eukaryotic
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