本论文选择烟草赤星病的病原真菌长柄链格孢(Alternaria longipes)为实验材料,选择在酵母中作为渗透压调节通路中的关键基因HOG1作为研究对象,对它在长柄链格孢中渗透压调节的作用以及对二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)产生抗药性的机理进行了研究。根据GenBank中报道的其它真菌的HOG1基因的保守序列设计一对简并引物,通过PCR扩增得到长柄链格孢.HOG1(AlHOG1)的保守序列,运用genome walking技术获得了长柄链格孢中的AlHOG1基因保守序列两端的序列,利用DNAman进行拼接获得AlHOG1基因的全长序列,并对该蛋白进行了同源性聚类分析。通过同源重组的方法构建AlHOG1基因的敲除载体,制备长柄链格孢的原生质体,将敲除片段导入原生质体中,利用潮霉素作为缺失转化子筛选标记,获得了三个缺失AlHOG1基因的转化子△AlHOG1-1、△AlHOG1-2和△AlHOG1-3。转化子经PCR和Southern blot验证后证明AlHOG1基因被特异性敲除。与原始菌株对照,突变菌株在无机盐、有机物和农药等作为渗透压调节剂的平板上生长都表现出相同的生长趋势,即:缺失了AlHOG1基因的转化子的生长能力都没有原始菌株好,甚至不能在高渗透压的平板上生长;转化子产生了较多黑色素,而黑色素的存在,是菌株在逆境中表现出来的一种调节方式。　　 论文的主要结果为:　　 1.扩增得到AlHOG1基因的全长序列,AlHOG1基因的编码框长度为1409bp,含有7个内含子,编码355个氨基酸,预测的分子量为40.69 kDa,等电点为5.45。同源性聚类分析表明,不同真菌来源的HOG1基因非常保守,尤其是链格孢属真菌的HOG1基因同源性达到99％。长柄链格孢的AlHOG1基因和其他生物来源尤其是真菌来源的HOG1基因在进化上较为保守,长柄链格孢的HOG1蛋白与其他真菌的亲缘关系较近,与细菌的亲缘关系较远。　　 2.通过同源重组和原生质体转化的方法,成功敲除了长柄链格孢的AlHOG1基因,获得了三株缺失转化子△AlHOG1-1、△AlHOG1-2和△AlHOG1-3,为进一步研究该基因的功能打下基础。　　 3.转化子与原始菌株在PDA平板、渗透压调节剂平板及农药平板上进行生。长比较后,证实了AlHOG1基因在长柄链格孢的渗透压调节中发挥了非常重要的作用,也是菌株产生抗药性的主要原因之一。而缺失转化子中大量黑色素的产生,是菌株对抗逆境的一种方式,也有可能参与了该菌株渗透压调节的过程。　　 论文的创新性　　 本论文首次报道了长柄链格孢的AlHOG1基因,通过基因敲除手段证实HOG1基因参与长柄链格孢的渗透压调节。