【摘 要】
:
目的:明确脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对人肺泡上皮细胞株A549细胞自噬的影响,初步探讨高迁移率族蛋白B1(High mobility group box-1 protein,HMGB1)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-actvated protein kinase kinase,AMPK)信号通路在A549细胞自噬中的调控作用及机制,从细胞层面初步揭示肺泡上皮细胞自噬在L
【基金项目】
:
2020年度广西高校中青年教师科研基础能力提升资助项目(2020KY13024);
论文部分内容阅读
目的:明确脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对人肺泡上皮细胞株A549细胞自噬的影响,初步探讨高迁移率族蛋白B1(High mobility group box-1 protein,HMGB1)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-actvated protein kinase kinase,AMPK)信号通路在A549细胞自噬中的调控作用及机制,从细胞层面初步揭示肺泡上皮细胞自噬在LPS所致急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratorty distress syndrome,ARDS)肺损伤发生发展中的作用,为ARDS的病程及临床治疗提供部分理论依据和实验基础。方法:(1)利用LPS刺激A549细胞,Western blot检测自噬相关分子标志物LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、Beclin-1的表达变化;(2)通过CCK-8实验检测不同剂量的LPS对A549细胞存活率的影响,取最低毒性剂量的LPS诱导A549细胞构建ARDS体外模型;(3)采用流式细胞术检测细胞凋亡和坏死情况,透射电镜观察细胞超微结构,观察有无自噬及细胞死亡形式;(4)用AMPK抑制剂(Compound C)干预,随机分为空白组、LPS组、AMPK抑制剂组和AMPK抑制剂+LPS组。通过Western blot实验和透射电镜检测自噬表达水平,研究AMPK信号通路与LPS诱导的A549细胞自噬及细胞死亡的关系;(5)用si RNA干扰技术抑制HMGB1,随机分为空白组、LPS组、SiHMGB1组、Si-HMGB1+LPS组。通过Western blot实验和透射电镜检测自噬表达水平,研究HMGB1与LPS诱导的A549自噬及细胞死亡的关系。结果:(1)LPS能诱导A549细胞自噬,具有浓度和时间依赖性,LPS处理A549细胞24h的最低毒性剂量为100μg/ml,且细胞的死亡形式为自噬性细胞死亡;(2)AMPK抑制剂干预实验中,与空白组相比,LPS组的P-AMPK和自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,AMPK抑制剂+LPS组的P-AMPK和自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ明显下降,表达量介于空白组和LPS组之间,差异有统计学意义(P<0.05),且电镜观察到自噬小体相对于LPS组减少;(3)si RNA干扰技术抑制HMGB1实验中,与空白组相比,LPS组的HMGB1和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),与LPS组相比,Si-HMGB1+LPS组的HMGB1蛋白表达和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达量明显下降,表达量介于空白组和LPS组之间,差异有统计学意义(P<0.05),且透射电镜观察到自噬小体相对于LPS组减少。结论:(1)LPS可诱导A549细胞产生自噬;(2)LPS能诱导A549细胞自噬性细胞死亡;(3)LPS通过AMPK信号通路诱导A549细胞自噬和自噬性细胞死亡,抑制AMPK信号通路能抑制A549细胞自噬形成;(4)HMGB1介导LPS诱导的A549细胞自噬和自噬性细胞死亡。
其他文献
目的:探讨改良穿刺孔入路下腹腔镜胆囊切除术+胆总管探查术的安全性及可行性。方法:回顾性分析2015年1月至2019年6月间右江民族医学院附属医院完成腹腔镜胆总管探查手术患者的临床资料,按照纳入标准筛选患者。根据手术是否留置T管将患者分为一期缝合组与T管引流组,在此前提下按照患者手术时Trocar的穿刺孔入路的不同分为两组,即改良组与传统组,分别运用改良穿刺孔入路下腹腔镜胆囊切除术+胆总管探查术与传
目的:收集中晚期原发性肝癌患者的临床资料,分析晚期患者与中期患者临床特征的差异,探讨不同治疗方式对患者预后的影响,为今后民族地区肝癌的诊治提供参考。方法:收集2016年1月至2019年9月在右江民族医学院附属医院住院治疗的856例中晚期原发性肝癌患者临床资料,包括一般资料、既往史、就诊原因、HBV病毒、肿瘤标志物、肝功能指标、Child-Pugh分级、门脉癌栓、治疗方法和生存期等。(1)根据BCL
目的:分析β-地中海贫血患者年龄、地域、基因突变类型及临床表现、血液检查结果、铁过载情况,比较不同年龄组间临床表现及血液学指标的差异,分析铁过载相关因素,以便为β-地中海贫血患者的诊断、治疗、遗传咨询等提供建议。方法:(1)收集2016年1月1日起至2020年12月31日于右江民族医学院附属医院就诊的共268名β-地中海贫血患者的民族、性别、年龄、地域、基因突变类型及地域分布、临床表现、血液学检查
目的:探讨免疫球蛋白和补体在HBV相关肝病患者中的差异性,同时分析其与肝癌临床病理特征相关性,为评估患者病情和指导临床治疗提供参考。方法:(1)回顾性分析2016年1月1日-2019年9月30日期间初次在右江民族医学院附属医院住院的310例HBV相关肝病患者的临床资料,其中慢乙肝组111例,乙肝肝硬化组98例,原发性肝癌组101例。收集上述各组病例的免疫球蛋白和补体结果,比较分析免疫球蛋白和补体在
目的:体外高糖培养成纤维细胞(fibroblasts,FB),观察美宝湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)对高糖培养的成纤维细胞生长的影响,通过观察MEBO对高糖培养的成纤维细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1、p62的调控作用,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn ointment/moist exposed burn ther
目的:观察强化血糖控制治疗对糖尿病合并溃疡创面患者血清外泌体miR-126-3p、miR-125b-1-3p变化及创面愈合的影响,从外泌体micro RNAs角度探讨强化血糖控制对促进糖尿病溃疡创面愈合的作用。方法:收集了45例有溃疡面的糖尿病患者第1天和治疗第10天的全血样本和部分创面肉芽组织,根据临床实际治疗情况分为以下2个组:强化血糖控制组(21例)、常规血糖控制组(24例);选取10例正常
目的:探讨桂西地区肝硬化食管静脉曲张破裂出血的危险因素。方法:选取2016年09月-2020年09月在右江民族医学院附属医院诊断为肝硬化食管静脉曲张患者共849例,经过筛选后符合要求的有355例,回顾性分析2016年09月-2020年09月355例肝硬化食管静脉曲张患者的临床资料,统计分析出血组与非出血组患者的一般情况:性别、年龄、民族、是否饮酒;是否有腹水;是否有肝性脑病;是否合并糖尿病;病因:
目的:观察血糖控制对糖尿病皮肤溃疡患者血清外泌体miR-21-5p表达及创面修复的影响,探讨血糖控制对糖尿病皮肤溃疡创面修复的作用机制,为临床应用提供理论依据。方法:经伦理审核批准,取46例2型糖尿病溃疡创面患者治疗前(第1天)及治疗后(第10天)的空腹静脉血液标本和溃疡创面组织,按照临床血糖控制情况分为2组:血糖严格控制组共30例,血糖常规控制组共16例。两组患者治疗方案不做特别限制,以胰岛素治
目的:分析并了解胃息肉患者临床特点及不同病理类型胃息肉的相关危险因素,提高对胃息肉的认识及诊断,探讨如何更好地早期发现、早期治疗及早期预防,同时为临床胃息肉患者的治疗提供理论参考依据。方法:(1)回顾性分析2017年1月1日至2020年6月30日在右江民族医学院附属医院行电子胃镜及病理检查确诊为胃息肉患者的临床数据共274例,按照不同病理类型分为腺瘤性息肉组(adenomatous polyps,
如何提高课堂40分钟的教学效果呢?我认为应着眼于精备、细备教案,巧妙地多渠道地设制每节课的课眼,以一节课的精要之处,牵动40分钟,在传授知识的同时,培养学生的思维能力,想象能力,不失为一种切实可行的方法,下面谈谈几种课眼的设置: