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番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的在番茄上危害常见且严重的一种病害。目前对灰霉病的防治方法仍以化学药剂为主,因此导致病原菌抗药性增强,同时农药的使用也对环境、人类及动物健康带来潜在风险。开发和利用微生物制剂和生物农药是进行绿色防治的有效方法,也是提升农产品质量的重要手段。因此,本研究以筛选优势生防木霉菌为基础,研究木霉菌诱导番茄的抗病分子机理及其互作过程中木霉菌milRNA的鉴定,为下一步探究木霉菌milRNA跨界调控番茄抗灰霉病菌的分子机理奠定基础。其主要研究结果如下:1.以实验室分离获得的23株木霉菌为材料,采用浸种、灌根处理,评价了木霉菌对番茄种子萌发、根系生长的影响,其中DQ-1、HN2325-2、HN2108-4、HL119四株木霉菌明显促进种子萌发与根系伸长。DQ-1效果最为明显,种子萌发率较对照提高6.64%;根长较对照增长37.86%。通过对峙平板培养,比较了这些木霉菌菌株对灰霉病菌的抑制效果,结果发现DQ-1对灰霉病菌的抑菌率高达88.41%。棘孢木霉DQ-1可作为防治番茄灰霉病的潜在生防菌株。2.棘孢木霉DQ-1灌根处理番茄后,可减轻叶片灰霉病的发生,表明棘孢木霉DQ-1可能诱导番茄的抗病性。通过荧光定量PCR技术检测根灌棘孢木霉DQ-1后,番茄根部和叶部的抗病基因(PR2、TPX)和茉莉酸乙烯信号通路基因(ETR1、CTR1、LOX1、PAL)表达情况。结果显示番茄根部的PR2和LOX1、TPX和ETR1、PAL分别在6h、12h和24h时达到最高表达水平,CTR1在6h下调表达至最低。在番茄叶片中ETR1、PR2和PAL、LOX1分别在12h、24h、48h达到表达最高值,CTR1在24h下调表达至最低,TPX在番茄叶部表达量无明显变化,表明棘孢木霉DQ-1灌根处理可以诱导番茄根和叶部的抗病基因以及茉莉酸乙烯信号通路基因的表达。3.根灌棘孢木霉DQ-1 24h后,挑战接种番茄灰霉病菌,结果发现番茄根部PR2、TPX、ETR1在接种后24h达到表达峰值,LOX1、PAL在12h达到表达峰值,CTR1在24h下调表达至最低。番茄叶片中PR2、ETR1、LOX1、PAL均在24h达到表达高峰,TPX在12h达到表达高峰,CTR1在12h下调表达至最低。结果显示棘孢木霉DQ-1处理番茄后,在挑战接种灰霉病菌条件下,同样可以提高番茄根部和叶部的抗病基因以及茉莉酸乙烯信号通路基因的表达,提高了番茄对灰霉病的抗性。4.为检测棘孢木霉DQ-1中是否存在milRNA参与诱导番茄抗病性。通过高通量测序技术,构建棘孢木霉DQ-1与番茄互作过程中DQ-1的miRNA测序文库,筛选和鉴定了相关的milRNA表达水平。结果鉴定出126个已知milRNA,预测得到21个新的milRNA。其中Tri-milR947-y、Tri-milR008-5p在木霉菌与番茄根部互作24h时达到表达量峰值,TrimilR5215-y在互作12h时下调表达至最低点、Tri-milR7122-x、Tri-milR001-3p在互作时12h达到表达高峰,Tri-milR004-3p在互作中表达量未显著变化,暗示milRNA Tri-milR947-y、Tri-milR008-5p、Tri-milR5215-y、Tri-milR7122-x、Tri-milR001-3p可能涉及到木霉菌诱导番茄抗病、抑菌和促生等方面的调控。