乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE)是由黄病毒科的乙型脑炎病毒(JEV)引起的以蚊虫为媒介传播的人畜共患病毒性疾病,猪是JEV的扩增宿主,带毒猪是本病的主要传染源,因此,防制猪患乙脑不但可以减少养猪业的损失,而且也是防制乙脑的重要措施。本研究旨在从四川地区分离猪乙型脑炎病毒,并且对分离株进行系统的生物学特性研究,为乙型脑炎的流行病学调查和分类学研究提供素材,并为有效地防控型乙脑提供理论依据。研究内容如下：1.乙型脑炎病毒四川株的分离与鉴定乙型脑炎病毒的分离：从四川多个地区猪场采集流产死胎及蚊虫样本30余份,将病料处理后接种BHK21细胞及3-5日龄乳鼠,细胞盲传至第4代时,接种采自崇州和内江猪场蚊虫样本的细胞出现细胞堆积、变圆变亮、死亡等疑似JEV病变,96hCPE即达到95%,随着传代代数的增加,细胞病变更加稳定；采用乳鼠对崇州及内江病料进行脑内接种,崇州株接种第三代后3天开始发病,内江株则是第五代开始发病。症状均为离群、拒乳、抽搐、发热、消瘦,至96-120 h出现毛耸、颤抖、强直、肢体痉挛、神经系统兴奋性增强。随着时间的推移,症状逐渐加剧,最终转为麻痹而死亡,其死亡率均为100%,剖检可见脑部充血、水肿。两株JEV疑似株的鉴定：以终点稀释法将病毒液进行初步纯化；对所分离病毒进行电镜超微结构观察、中和实验、琼扩实验、间接免疫荧光实验、间接ELISA实验、以及保守区序列测定。结果为：细胞超薄切片电子显微镜下观察可见60nm左右病毒颗粒；所分离病毒能被JEV阳性血清所中和；琼扩实验、间接免疫荧光实验、间接ELISA实验均呈阳性反应；经PCR均可扩增出其Prm-E基因的高保守区(439bP)。以上试验证实本试验所分离到的病毒为JEV,崇州株命名为CZ-1株,内江株命名为NJ-1株。2.四川分离株的生物学特性分析病毒的核酸类型实验证明CZ-1株和NJ-1株均为RNA病毒；有血凝性；理化实验实验证实该两株病毒均对乙醚、氯仿和去胆酸盐敏感,为囊膜病毒,在PH3-5条件下病毒颗粒易失活,经胰蛋白酶处理后其感染力明显下降,60℃加热60min、100℃加热3min均可使其灭活。CZ-1株和NJ-1株病毒TCID50值分别为10-6.206/0.025ml和10-5.215/0.025mL；对3-5日龄乳鼠的致死性均为100%,对9-11g小鼠,无论脑内、皮下、腹腔毒力都差距不大,但对14-16g较大日龄小鼠的皮下毒力则差别明显。取小鼠脑、心、肝、肺、脾、肾等脏器组做组织切片,镜下观察可见病毒除了造成脑膜内炎性细胞浸润,脑组织内神经细胞变性坏死外,还侵害乳鼠肝、肺、心、肾等组织,造成实质器官的病变,其中cz-1株脑部出现明显的软化坏死灶。