液相芯片技术检测血清过敏原特异性IgE实验研究

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目的:血清过敏原特异性IgE抗体检测为过敏体外检测的主要方法,过敏体外检测方法诸多,其中ImmunoCap法为“金标准”,较传统固相支持物,使用了纤维素衍生物,具有吸附蛋白更多,反应速度更快、敏感性和特异性更好的优点,然而,价格相对较贵;免疫印迹法也称蛋白质印迹法,固相支持物为硝酸纤维素膜,虽敏感性差、特异性差,但同时能够对多种特异性IgE抗体进行检测,临床上得到广泛应用;近年来,液相芯片技术在诸多领域的发展,越来越得到医学科学领域的广泛认可,现利用该技术建立液相芯片法检测过敏原特异性IgE抗体水平,并与临床上广泛应用的免疫印迹法进行比较,评价该液相芯片法在过敏原特异性IgE抗体检测中的线性、灵敏性、重复性等指标,为过敏临床诊断提供新的更科学的参考依据。方法:收集天津市中医药研究院附属医院皮肤科2015年10月—12月临床上怀疑过敏患者的血清,应用免疫印迹法检测120例患者血清过敏原特异性IgE水平,统计与液相芯片法对应的12种过敏原特异性IgE阳性率,并选取研究对象,以便作为对照组;建立过敏原总IgE和特异性IgE液相芯片检测法,评价其线性、灵敏度等指标;利用液相芯片法检测患者血清尘螨过敏原特异性IgE水平,与免疫印迹法进行相关性分析;检测血清牛奶过敏原特异性IgE和血清艾蒿过敏原特异性IgE水平,评价其临床符合率。应用SPSS18.0统计学软件对各变量进行统计学分析,比较两组间sIgE水平用非参数检验,P<0.05被认为有统计学意义。用Spearman等级相关系数评价等级相关性,P<0.05被认为有统计学意义。配对资料数值比较用Wilcoxon的秩和检验,P<0.05被认为有统计学意义。结果:免疫印迹法检测120例过敏患者血清中特异性IgE抗体水平,尘螨过敏原特异性IgE阳性率最高61.7%;液相芯片法检测总IgE标准品的线性范围为0.41ng/mL~100ng/m L;液相芯片法检测过敏患者血清总IgE水平,评价其重复性,批内CV介于1.20%~2.86%之间;批间CV介于1.84%~4.91%之间;应用液相芯片法与免疫印迹法同时检测120例中随机挑选的50患者血清尘螨过敏原特异性IgE抗体水平,进行统计学分析,结果r=0.55(p<0.001,n=50),表明两种方法检测血清过敏原特异性IgE水平有相关性,且良好,应用液相芯片法分别对10例已确诊为牛奶过敏的患者和10例艾蒿过敏的患者,检测其过敏原特异性IgE水平,结果阳性率100%,说明该方法具有较好的临床符合性。结论:1.传统免疫印迹法检测血清过敏原特异性IgE,发现尘螨阳性率最高,其次为蟑螂、大豆、牛奶和艾蒿。2.本研究利用液相芯片技术和博敏达液相芯片反应动力学专利,建立了血清总IgE和过敏原特异性IgE液相芯片检测法,此方法线性范围宽、重复性好、结果稳定。3.液相芯片法与免疫印迹法相关性较好,前者灵敏度优于后者。4.与临床过敏确诊病例比较,液相芯片法对牛奶和艾蒿的特异性IgE检测符合率100%,灵敏度高。
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