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目的：研究哮喘外周血单个核细胞氧化应激的情况以及核因子转录蛋白κB（NF-κB）和8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（OGG1）表达，探讨人B淋巴母细胞在氧化应激下的细胞增殖，研究氧化应激在哮喘发病中发挥的可能作用机制。内容与方法：第一部分：收集2011.2-2011.12泸州医学院附属医院呼吸内科就诊的哮喘患者16例，按照支气管哮喘GINA（全球哮喘防治创议）标准，按其严重程度分为轻中度哮喘组，重症哮喘组（所有研究患者均处于急性发作期），正常健康体检者作为对照。淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞（PBMC）备用。分别以2’，7’-二氯荧光素二乙酸酯（2’，7’-dichlorofluorescin-diacetate，DCFH-DA）法和二氢乙啶（DHE）法检测胞内活性氧（ROS）的产生情况；WST法检测血清中SOD的表达。单细胞凝胶电泳法检测胞内DNA损伤的情况。采用间接荧光免疫法测定胞内OGG1蛋白和核因子转录蛋白κB（NF-κB）的表达。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子a（TNF-a）含量。第二部分：用脂多糖（LPS）和维生素C分别刺激人B淋巴母细胞建立氧化和抗氧化细胞模型，2’，7’-二氯荧光素二乙酸酯（2’，7’-dichlorofluorescin-diacetate，DCFH-DA）法检测细胞内ROS的产生情况；总SOD活性检测试剂盒（Total SuperoxideDismutase Assay Kit with WST-1）酶标仪检测显示患者血清中超氧化物歧化酶（SOD）单细胞凝胶电泳法检测去氧核糖核酸（DNA）损伤情况；用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定上清液中肿瘤坏死因子a（TNF-a）变化。用细胞增殖示踪荧光探针(CFDA SE)法间接检测细胞增殖的情况。结果：1.临床试验：1.通过荧光探针DCFH-DA和DHE探针检测发现哮喘患者外周血单个核细胞内平均荧光强度明显高于正常对照组，重症哮喘中荧光强度升高最为明显。总SOD活性检测试剂盒（Total SuperoxideDismutase Assay Kit with WST-1）酶标仪检测显示患者体内超氧化物歧化酶（SOD）的表达明显下降。重症组中SOD表达最低；单细胞凝胶电泳激光共聚焦下观察DNA损伤情况：哮喘患者存在DNA损伤，重症哮喘患者DNA损伤最为明显；间接荧光免疫法测定OGG1阳性表达结果显示重症哮喘组和轻中度哮喘组阳性表达率较对照组表达率明显增高，重症哮喘组阳性表达率最高；间接荧光免疫法测定外周血单个核细胞NF-κB表达，轻中哮喘组和重症哮喘组较对照组明显增高；2.细胞（人B淋巴母细胞）试验：通过荧光探针DCFH-DA法测定，显示LPS+维生素C刺激组较LPS刺激组ROS的产生减少，与正常对照组比较无明显差别；单细胞凝胶电泳结果显示，LPS刺激组细胞DNA损伤最为明显，而LPS+维生素C刺激组DNA损伤程度减轻，但较正常对照组仍存在一定程度的损伤;上清液中TNF-a表达LPS组最为明显; CFDASE法检测细胞增殖，显示LPS细胞增殖成剂量相关性，而LPS+维生素C可以抑制细胞增殖。结论：1.氧化应激参与了哮喘的发生发展，在哮喘疾病发病机理中占有重要的作用，且哮喘疾病严重度与氧化应激密切关系；氧化应激参与DNA的损伤，介导外周血单个核细胞OGG1和NF-κB的表达增加。2.LPS能够成功建立细胞氧化应激模型，引起DNA的损伤，抗氧化能够减轻DNA氧化损伤。氧化应激促进细胞增殖，参与上调细胞因子TNF-a表达。