隐孢子虫(Cryptosporidium)引起的隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是一种全球性的人畜共患病。在免疫正常的人群中,隐孢子虫只会引起自限性腹泻,而对于免疫抑制或免疫缺陷者则会引起致死性腹泻。隐孢子虫能依靠其膜上ATP结合盒式转运蛋白(Cryptosporidium parvum ATP-bindingcassette transporter, CpABC)进行营养物质的转运调节(隐孢子虫的简化代谢途径),与此同时还具有多向抗药性与免疫作用的特性,这也是许多药物和疫苗对隐孢子虫病治疗无效的主要原因。因此,深入地研究隐孢子虫CpABC蛋白,对揭示隐孢子虫致病机制,研发有效的抗隐孢子虫药具有重要意义。一,以安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)基因组DNA为模板,根据Genbank中获得的ATPase基因序列合成ATPase基因序列的引物。扩增出876 bp的基因片段,翻译得到大小为292 aa的氨基酸序列。二,以安氏隐孢子虫基因组DNA为模板,分别根据Genbank中获得的CpABC1基因序列合成(Cryptosporidium parvum ATP-bindingcassette transporter 1, CaABC1蛋白基因序列的引物(加酶切位点EcoRⅠ和BglⅡ、起始子ATG和终止子TAA)。扩增出522 bp的基因片段,翻译得到大小为174 aa的氨基酸序列。将克隆的重组质粒CaABC1与真核表达质粒pEGFP-C1双酶切后连接构建出重组真核表达质粒pEGFP-C1-CaABC1,转染到小鼠IEC细胞进行表达。之后检测处理好的空白组、对照组、转染组和加抑制剂组的IEC细胞内液和细胞外液中的K+、Ca2+、Na+和Mg2+浓度,发现4种离子被从细胞外转运到细胞内,其中转运Ca2+离子效果最明显。三,以安氏隐孢子虫基因组DNA为模板,分别根据Genbank中获得的CpABC2基因序列合成CaABC2蛋白基因序列的引物(带有起始子ATG、终止子TGA以及酶切位点XhoI、XbaI)。扩增出756 bp的基因片段,翻译得到大小为252 aa的氨基酸序列。将克隆的重组质粒CaABC2与真核表达质粒pEGFP-C1双酶切后连接构建出重组真核表达质粒pEGFP-C1-CaABC2,转染到小鼠IEC细胞进行表达。之后检测将处理好的空白组、对照组、转染组和加抑制剂组的IEC细胞内液和细胞外液中的胆固醇、谷胱甘肽、葡萄糖和磷酸酶的浓度,发现4种营养物质被从细胞外转运到细胞内,其中转运胆固醇效果最明显。