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野木瓜(Stauntonia chinensis DC)在临床上用于治疗各种神经性头痛,效果显著。为了探讨野木瓜治疗神经痛的有效成分,研究了野木瓜中的苷类提取物和野木瓜注射液(IS,市售)对脊髓神经细胞的作用。
实验通过震荡提取法、硅胶柱层析法对野木瓜中的苷类物质进行提取、分离;紫外光谱法对提取物进行表征;小鼠脊髓神经细胞进行原代培养、建立脊髓神经细胞缺血缺氧模型(MHI);采用形态学观察法、MTT法、荧光法、SOD法、观察与测量神经细胞的生长状态,分析野木瓜苷类物质提取物和IS对神经细胞的保护作用。
从野木瓜中获得AI粗提物,其中三萜类皂苷的含量是52.4%,黄酮苷的含量是17.9%;硅胶柱层析法进一步分离得到AI2、AI3、AI4这三类苷类物质。它们分别溶于脊髓神经细胞培养液。MTT法测定细胞活性,正常对照组、MHI对照组、MHI+AI450mg/L组和MHI+AI4200mg/L组的OD值分别是0.4567±0.0443、0.2071±0.0389、0.3 167±0.0602、0.2861±0.0373(n=6)。与MHI组相比,MHI+AI450mg/L组和MHI+AI4200mg/L组对MHI缺血缺氧脊髓神经细胞有保护作用(P<0.05),而AI2、AI3无此效果(P>0.05)。IS溶于培养液后加入缺血缺氧培养的脊髓神经细胞中。实验分组为正常对照组、MHI对照组、MHI+IS 100mg/L组、MHI+IS 200mg/L组。用MTT测定细胞活性得到各实验组的OD值分别是0.4342±0.0073、0.1576±0.0228、0.4321±0.0212、0.3081±0.0171、0.2770±0.0196(n=7)。用试剂盒测得SOD值分别为13.54±1.38、7.57±0.75、10.42±0.43、12.61±1.15、9.94±2.10;用显微计数得到细胞数分别为32.00±2.45、18.50±1.65、29.50±2.20、25.50±1.51。与MHI组相比,MHI+IS 100mg/L组和MHI+IS 200mg/L组对缺血缺氧脊髓神经细胞有保护作用(P<0.05),特别是浓度为100mg/l时效果最好(P<0.01)。IS溶于培养液后,加入正常条件培养的细胞中。实验分组为正常对照组、IS50mg/L组、IS 100mg/L组、IS 300mg/L组。用MTT测定细胞活性得到各实验组的OD值分别是0.4038±0.0162、0.5021±0.0182、0.5621±0.0301、0.3910±0.0141(n=5);用试剂盒测得SOD值分别为12.21±1.38、13.23±1.15、15.14±2.10、12.12±0.90;用显微计数得到细胞数分别为27.50±3.52、29.50±3.02、35.25±3.15、28.50±2.23。与正常对照组比,IS 50mg/L组和IS 100mg/L组对脊髓神经细胞生长有促进作用(P<0.05),100mg/L组效果最好(P<0.01)。
综上所述,野木瓜的提取物大部分是三萜类皂苷和黄酮苷;野木瓜提取物AI4对MHI神经细胞有保护作用;一定浓度的IS对MHI脊髓神经细胞有保护作用,对脊髓神经细胞生长有促进作用。