论文部分内容阅读
背景:肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance,MDR)是由一种药物诱发,引起对其它多种不同结构的药物同时产生交叉耐药,导致一些联合化疗方案的失败。多药耐药产生的机制多种多样,主要包括减少细胞内药物蓄积、抑制细胞凋亡以及增强DNA修复等多方面,各种机制往往交叉存在。最近有很多研究证实,无论何种机制存在,细胞内pH(intracellular pH,pHⅰ)增高是耐药细胞株所具有的共同改变。已有研究表明,细胞内酸化降低细胞pHⅰ后,能够抑制K562/A02耐药细胞株中P-gp的表达和功能,从而增加细胞对罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)的累积,逆转细胞耐药。P-gp是由MDR1基因编码的,ATP依赖性的跨膜外流泵,它可将细胞内化疗药物排出细胞,降低胞内化疗药物的蓄积浓度进而使肿瘤细胞逃避药物带来的毒害,从而导致肿瘤细胞耐药。有临床的研究显示,许多白血病病人肿瘤细胞的耐药与MDR1基因的表达没有显著相关性,但在某些低表达P—gp的肿瘤细胞内的Rh123却有显著的变化。目前在不表达或低表达MDR1基因且分化程度低的细胞中,利用细胞酸化改变细胞pHi,是否会改变细胞对罗丹明123的累积尚未见报道。
目的:本研究通过改变肿瘤细胞系HL-60、间充质干细胞以及CD34+脐血细胞pHi,探讨三种细胞在不同pHi下其细胞内Rh123累积的变化,为明确二者关系提供实验依据,并且为逆转肿瘤多药耐药提供新的方法。
方法:在不表达或低表达MDR1且分化程度较低的细胞中,探讨利用细胞酸化改变细胞pHi,其罗丹明123的累积变化,为抗白血病多药耐药(multidrug resistance,MDR)提供新方法。应用高钾缓冲溶液和钠氢交换蛋白1(NHE1)的特异性抑制剂酸化细胞,改变细胞内pH值；采用MTT法观察高钾缓冲溶液和NHE1的特异性抑制剂诱导的细胞内酸化对细胞活力的影响；应用激光共聚焦显微镜测定HL-60、MSC及CD34+脐血细胞pHi值；采用实时定量PCR技术检测细胞酸化前和酸化后MDR1基因在mRNA水平的表达；应用流式细胞术检测细胞酸化对HL-60、MSC及CD34+脐血细胞内Rh123累积的影响。
结果:半定量PCR和实时定量PCR检测结果显示,HL-60、MSC及CD34+脐血细胞的MDR1基因在mRNA水平上未见明显表达MDR1基因,正常条件下,三种细胞pHi值之间没有显著差异。细胞酸化3小时对HL-60、MSC及CD34+脐血细胞的活力无明显影响；在相同pHi的条件下,HL-60、MSC及CD34+脐血细胞内Rh123(Rhodamine123,Rh123)的累积与对照相比有显著差别；此外,细胞分化程度越低,其细胞内Rh123的累积越少。
结论:在HL-60、MSC及CD34+脐血细胞这三种不表达或低表达MDR1的细胞内,Rh123的累积呈现pHi值负相关效应；并且,细胞分化程度越低,细胞内Rh123的累积越少。上述结果从另一方面说明,细胞pHi的增高可能有助于肿瘤细胞对抗化疗药物的杀伤作用而促进耐药的发生与发展,并且对于分化程度低的肿瘤干细胞来说,对抗化疗药物的杀伤作用可能更强。