第一章 β-淀粉样肽抑制剂的高通量筛选 阿尔茨海默症(AD)是老年期发生的以进行性痴呆为特征的大脑变性疾病。由于AD形成的机制不明,现在在临床上使用或试验的药品如胆固醇抑制剂,抗炎药及胆碱酯酶抑制剂等,各针对不同的机制来治疗,最多只能使病情减轻或不再恶化,还没有可以完全治疗的药物和方法。AD细胞模型是在体外进行诱导,通过模拟AD脑中主要病变而建立的,在药理学研究中主要应用于寻找防治AD药物的作用靶位点,建立药物筛选模型,在细胞、亚细胞及分子水平上观察药物对病变的防治作用。海马及皮层与学习记忆有关,也是发生衰老变化最早部位。AD病理改变主要发生于海马和新皮层。因此选用原代培养的海马及皮层神经元作为研究AD的细胞较为理想。但原代培养神经细胞相对难度大,周期长,所以我们同时采用具有神经细胞特性,又可稳定传代的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y用于构建β-淀粉样肽(Aβ)诱导退变的模型,快速筛选β-淀粉样肽抑制剂。很多证据表明Aβ是诱导AD发生的主要病理环节,以Aβ诱导的SH-SY5Y细胞株退行性病变是老年性痴呆疾病的一个较贴近的模型。我们实验中建立了Aβ诱导的SH-SY5Y细胞株退行性病变模型用于高通量筛选Aβ抑制剂。 在我们的前期筛选实验中发现了数十种天然药物对Aβ毒性有抑制作用,其中EUK提取物作用最强。对其有效成分进行分离,化合物以Aβ诱导的神经母细胞瘤株SH-SY5Y退行性病变模型继续筛选发现EUK4010对Aβ毒性有较强抑制作用。目前我们针对这个化合物已申请了其作为Aβ抑制剂用途的中国和美国专利保护。 在我们的实验中,显示EUK4010对Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞退行性病变化具有双向作用,在一定浓度范围内,EUK4010能明显保护SH-SY5Y细胞抵制Aβ1-42的毒性作用。据报道EUK4010本身对肿瘤细胞具有诱导分化作用,在我们的实验中也发现高浓度时,EUK4010本身能抑制SH-SY5Y细胞生长,诱导分化。但在高达50μM浓度范围内EUK4010本身对原代培养的海马神经元显示没有显著的抑制作用,这与原代培养的神经