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目的:本课题主要通过对熟地黄及六味地黄胶囊的质量标准进行深入研究,提升现有标准,为地黄及六味地黄胶囊的质量提升研究提供合理科学依据。方法:1.目标成分分离:对50kg熟地黄药材采用乙醇热回流得4.6kg浸膏,通过化学柱层析方法,先后通过D101大孔树脂、MCI柱、以及制备液相分离纯化,制备对照品。2.生地及熟地质量标准提升研究:以梓醇和毛蕊花糖苷作为生地TLC鉴别指标成分,采用高效MN254薄层板,用乙酸乙酯:甲醇:甲酸:水=14:3:1:1.8展开系统,喷10%硫酸乙醇显色。以毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷作为熟地TLC鉴别指标成分,采用烟台薄层板,用三氯甲烷:甲醇:水（13:7:2）下层溶剂展开系统,喷10%硫酸乙醇显色。采用MGⅡ（4.6×250 mm,5μm）色谱柱,选择乙腈-0.1%甲酸水作为流动相梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,进样量为10μl,334nm检测,以毛蕊花糖苷为内参物,建立一测多评法测定洋地黄叶苷C、焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1四个苯乙醇苷类成分的含量。并通过LC-MS鉴定出8个苯乙醇苷类成分,建立HPLC-fingerprint图谱。以毛蕊花糖苷为参考峰,标记为S,计算指纹图谱中峰的相对保留时间及相对峰面积,进行方法学考察。3.六味地黄胶囊质量标准提升研究:分别在现行15增补版药典基础上建立提升六味地黄胶囊中熟地、茯苓的薄层鉴别。以毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为指标成分,定性鉴别复方中熟地,采用烟台薄层板,展开剂为氯仿:甲醇:水（13:7:2）,喷以10%硫酸乙醇溶液显色,在白光下观察。以茯苓酸为指标成分,定性鉴别复方中茯苓,采用进口高效Merck 254薄层板,展开系统为氯仿:乙酸乙酯:甲酸（10:2:0.2）,在白光下检视。同时以毛蕊花糖苷为熟地中定量指标成分,采用Uni Sil?5-120 C18-Polar（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,选择乙腈-0.1%磷酸水作为流动相梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,进样量为10μl,334nm检测。以茯苓酸为茯苓中定量指标成分,采用Chrom CoreTM C18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,选择乙腈-0.1%磷酸水作为流动相梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,进样量为10μl,210nm检测。结果:1.目标成分分离:从熟地黄中分离纯化得到9个化合物,根据理化性质、光谱和波谱数据鉴定为7个苯乙醇苷类,和2个环烯醚萜类化合物。其中苯乙醇苷类化合物分别为洋地黄叶苷C、海胆苷、焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、异毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷D,环烯醚萜类化合物为龙胆苦苷和獐牙菜苷。2.生地及熟地黄质量标准提升研究:生地和熟地薄层图均清晰,供试品和对照药材与对照品在相同Rf值上有相同颜色的斑点。熟地黄和生地黄HPLC含量测定经过方法学考察和验证,该方法具有良好的准确性和耐用性,并且克服了参考标准品的不足,简单可行。测定的18批生地和17批熟地样品,四种苯乙醇苷类成分含量范围分别在0.4504～2.5086 mg/g和0.4644～1.9778 mg/g。18批生地和17批熟地相似度均在0.9以上（除1批生地外）。3.六味地黄胶囊质量标准提升研究:定性鉴别复方中,各个薄层色谱图中供试品与对照品信息一致,阴性样品则无相应斑点。2个成分含量测定方法精密度好,准确度高。25批修正胶囊样品毛蕊花糖苷含量范围在0.005～0.065 mg/粒,检测了25批修正胶囊样品茯苓酸含量范围在0.046～0.078mg/粒。结论:1.起草了生地和熟地质量标准提升草案,新增或改善生地及熟地薄层鉴别方法,规定生地黄此4种苯乙醇苷类成分含量不得低于0.08%,熟地黄此4种苯乙醇苷类成分含量不得低于0.07%,地黄经炮制处理前后,相似度高,表明主要化学成分基本无差异性。同时一测多评定量分析方法结合HPLC指纹图谱特征区分方法,可成功用于评价地黄的质量。2.起草了六味地黄胶囊标准草案,规定六味地黄胶囊中毛蕊花糖苷含量不得低于20μg/粒,茯苓酸含量不得低于35μg/粒。