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目的:研究APN(脂联素,adiponectin)在阿霉素所致急性心肌损伤炎性反应中的抗炎效应及其机制。方法:1.模型建立选取8周龄体重相近的雄性野生C57、纯合APN-KO小鼠,实验组小鼠一次性腹腔注射累计量为20mg/kg的阿霉素(adriamycin,ADM)[1],对照组腹腔注射等量生理盐水。期间给予充足普通饲料、水。2.实验分组实验动物随机分为四组:野生实验组(WT+ADM),野生对照组(WT+saline),脂联素实验组(KO+ADM),脂联素对照组(KO+saline)。3.实验方法阿霉素干预5天后,收集血清,检测血清CK-MB、c Tn I、IL-6、TNFα、TGF-β水平;剪取心肌组织,取心尖组织固定,用HE染色观察心肌组织形态学改变,免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)观察炎性细胞浸润;剩余心肌组织采用Western blot检测心肌组织APPL1、AMPK、PPARγ、OPN蛋白的表达水平。结果:1.心肌损伤标志物水平比较:CK-MB、c Tn-I:与WT实验组相比,APN-KO实验组CK-MB、c Tn-I血清浓度增加(CK-MB:3.00±0.25 vs 3.35±0.47,P<0.05;c Tn-I:77.66±64.30 vs 298.92±212.04,P<0.05);与APN-KO对照组相比,APN-KO实验组CK-MB、c Tn-I血清水平升高(CK-MB:2.95±0.15 vs 3.35±0.47,P<0.05;c Tn-I:54.46±24.58 vs 298.92±212.04,P<0.05)差异有统计学意义。2.各组IL-6、TNF-α和TGF-β水平比较:IL-6、TNF-α:与WT实验组相比,APN-KO实验组IL-6、TNF-α血清浓度增加(IL-6:30.96±14.34 vs 71.71±51.51,P<0.05;TNF-α:54.76±12.96 vs 100.01±19.57,P<0.05);与APN-KO对照组相比,APN-KO实验组IL-6、TNF-α血清水平升高(IL-6:35.15±25.17 vs 71.71±51.51,P<0.05;TNF-α:78.84±12.07 vs 100.01±19.57,P<0.05),差异有统计学意义。TGF-β:各组相互比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.各组APPL1、AMPKα、PPARγ和OPN水平比较:APPL1:与WT实验组相比,APN-KO实验组心肌组织APPL1表达明显降低(0.30±0.06 vs 0.07±0.01,P<0.05);与WT对照组相比,APN-KO对照组APPL1水平下降(0.28±0.07 vs0.08±0.01,P<0.05),差异有统计学意义。AMPKα:仅APN-KO实验组与APN-KO对照组之间差异具有统计学意义,APN-KO实验组AMPKα心肌组织表达水平增加(1.20±0.28 vs 0.69±0.17,P<0.05)。PPARγ:与WT对照组相比,APN-KO对照组、WT实验组PPARγ心肌组织表达水平升高(0.94±0.09 vs 1.61±0.49,P<0.05;0.94±0.09 vs 1.69±0.24,P<0.05)差异有统计学意义。OPN:四组之间相互比较,差异均有统计学意义。实验组较对照组OPN表达水平增加(WT:1.88±0.09 vs 1.04±0.07,P<0.05;APN-KO:3.24±0.40 vs 2.51±0.25,P<0.05);APN-KO实验组OPN心肌组织表达水平高于WT实验组(3.24±0.40 vs 1.88±0.09,P<0.05),APN-KO对照组OPN心肌组织表达水平高于WT对照组(2.51±0.25 vs1.04±0.07,P<0.05)。差异均有统计学意义。4.HE结果:除两个对照组之间相比无统计学差异外,其余各组比较差异均有显著性(P<0.01)。巨噬细胞、T细胞在实验组血管周围分布较多,亦散在分布于心肌纤维间。其在各组中的数量比较:巨噬细胞除了在WT+ADM与WT+saline两组间比较无差异外(P>0.05),其余各组比较均有差异(P<0.05)。CD3阳性T细胞各组相比差异均有显著性(P<0.01)。结论:1.与WT+ADM组相比,APN+ADM组促炎因子(IL-6、TNF-α)水平升高,说明APN具有抗炎效应。TGF-β血清水平无差别,可能由于损伤早期组织纤维化活动不明显,主要以系统炎症反应为主。2.本实验提示APPL1-AMPKα-PPARγ-OPN通路参与心肌纤维化病变早期的炎症反应。在APN作用下,脂联素受体(Adipo R1、2)的胞内结构域与APPL1结合,促进蛋白激酶LKB1的表达,从而活化AMPK;活性AMPK作用于下游靶分子PPARγ,降低局部炎症反应,抑制炎性介质的释放;PPARγ调节OPN的基因转录,OPN以RGD—整合素依赖的方式作用于巨噬细胞、肌母细胞,引起晚期心肌纤维化。巨噬细胞也可以产生OPN,如此形成心肌局部的恶性循环。