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捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是牛羊等反刍动物的一种重要消化道寄生虫。目前,药物防治是控制该病的主要方法,但药物残留、环境污染、抗药性虫株的出现和蔓延,使得传统的治疗受到严重挑战,迫切需要一种有效的防治方法以控制其感染和流行。捻转血矛线虫H11蛋白是一种分子量在110ku的完整膜糖蛋白复合物,可引起与血清抗体有关的高水平的保护作用。天然H11免疫动物后,可使雄虫减少70%、雌虫减少80%、虫卵减少90%,且对不同年龄阶段的绵羊均具有保护作用,且其保护率与抗体水平也呈正相关。但是由于原核系统对表达产物的翻译后加工、修饰、糖基化等作用不能达到真核系统的要求,其重组形式仅能提供很小的免疫保护,免疫效果远不及天然抗原。目前获取H1l所需的成虫是从自然感染羊的皱胃里采得,成本高且操作复杂,受季节性及羊自身感染程度等因素的限制,往往混杂其他线虫,具有纯度和数量的不确定性,不适合于长期研究,·不能适应科研的大量需要。急切需要找到一种利用体外培养来大量获得虫体的方法。本研究探索了温度、pH值、培养基等因素在离体培养中的作用及相互关系,优化了捻转血矛线虫离体培养体系。对培养的L4期幼虫和自然感染的成虫的H11天然蛋白分别进行了提取和纯化,并进行了氨基肽酶活性分析。为利用体外培养获取捻转血矛线虫H11天然抗原和制备天然抗原疫苗的研究奠定基础。1.相同条件下,在一定的温度范围内,虫卵的孵化率及孵化速度与温度成正比,虫卵的最适发育温度为34℃,孵化率高达97%。2.相同条件下,NCTC135、NCTC109、和M199培养系中的L3可发育至L4晚期,F12中L4只发育至早四期,四种培养系中L3发育至L4的虫体数占存活虫体数的比例以NCTC135中的最高,达99%。3.pH5.8-6.2时,L3发育至L4速度慢,发育率不到50%；pH6.5-6.7时,L3发育至L4的程度及发育率明显提高,以pH6.7为最佳。4.成功提取并纯化了L4期幼虫及成虫体内的H11天然蛋白,经SDS-PAGE电泳分析证实了H11蛋白的分子量为110ku,H11蛋白在L4期幼虫及成虫体内均有表达,且主要存在于成虫体内。5.对L4幼虫及成虫H11蛋白的氨基肽酶活性分析表明,H11天然蛋白同时具有氨肽酶M活性和氨肽酶A活性。6.对H11酶抑制剂敏感性测定得出EDTA和邻二氮杂菲对其酶活性均有抑制作用。