【摘 要】
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目的:探究敲低甘油二酯激酶γ（DGKγ）对神经干细胞（NSCs）迁移的影响及相关机制。方法:原代培养大鼠NSCs,分别经DGKγ-sh RNA慢病毒感染（DGKγ-sh RNA组）、DGKγ抑制剂R59949（R59949组）和PKC激动剂PMA（PMA组）处理,设Scramble慢病毒感染的Scramble组、培养基仅添加溶剂的Vector组和未做任何处理的Control组为对照。用Transw
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目的:探究敲低甘油二酯激酶γ（DGKγ）对神经干细胞（NSCs）迁移的影响及相关机制。方法:原代培养大鼠NSCs,分别经DGKγ-sh RNA慢病毒感染（DGKγ-sh RNA组）、DGKγ抑制剂R59949（R59949组）和PKC激动剂PMA（PMA组）处理,设Scramble慢病毒感染的Scramble组、培养基仅添加溶剂的Vector组和未做任何处理的Control组为对照。用Transwell小室迁移实验和显微测量NSCs水平迁移距离方法检测各组NSCs的迁移能力变化,Western blotting法检测PKCδ、PKCγ、ERK1/2磷酸化程度,ELISA法检测甘油二酯（DAG）含量的变化。结果:经DGKγ-sh RNA慢病毒感染的NSCs,DGKγ表达显著低于Scamble组（P<0.001）。与Scramble组或Vector组相比,DGKγ-sh RNA组、R59949组和PMA组细胞Transwell小室纵向迁移数量均显著减少（均P<0.001）,水平迁移距离也均显著缩短（均P<0.001）。Western blotting检测PKCγ、PKCδ、ERK1/2磷酸化程度,结果显示:与Scramble组或Vector组相比,DGKγ-sh RNA组、R59949组和PMA组p-PKCδ/PKCδ值和p-ERK1/2/ERK1/2值显著增高（均P<0.001）,p-PKCγ/PKCγ值在DGKγ-sh RNA组和R59949组增高不明显（均P>0.05）,但在PMA组显著降低（P<0.001）。ELISA法检测NSCs内DAG含量,显示各实验组DAG含量均明显高于Scramble组或Vector组（DGKγ-sh RNA,P<0.05;R59949,P<0.01;PMA,P<0.001）。结论:DGKγ低表达可降低NSCs迁移能力,DGKγ的酶活性中心与NSCs迁移有关,DGKγ通过DAG/PKCδ/ERK途径调节NSCs迁移。
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