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EBNA1是唯一一种在EB病毒四种隐性感染状态均存在的病毒产物，EBNA1通过与隐性感染复制起始区oriP结合，维持EB病毒以染色体外附加体的形式存在。本研究利用EBNA1与oriP的关系，以EBNA1作为靶基因，将oriP增强子片段与启动子结合，插入到腺病毒复制关键基因E1区上游，从而使腺病毒复制只限在EBNA1阳性细胞中进行，而在EBNA1阴性细胞中不复制，以达到特异性杀伤EB病毒相关肿瘤的目的，为EB病毒相关肿瘤的治疗提供新的方法。本研究包括以下三个方面： 1．EBNA1阳性上皮细胞模型的建立： 将1200bp的EBNA1基因片段插入真核细胞表达载体pcDNA3中，获得质粒poDNA3／EBNA1，用脂质体介导将pcDNA3／EBNA1质粒转入鼻咽癌CNE2细胞和人宫颈癌Hela细胞，通过G418进行阳性克隆的筛选，PCR、RT-PCR和Western Blot进行鉴定，结果表明，两种转基因细胞株能够表达EBNA1，为研究EB病毒相关肿瘤提供了良好的细胞模型。 2．EB病毒复制起始区（oriP）对转录增强作用的研究： oriP是EB病毒染色体上一个1.7kb大小的区域，它维持了EB病毒质粒在EBNA1阳性细胞中的复制和稳定存在，为了在EBNA1阳性细胞中筛选出oriP对转录最具增强作用的功能片段，利用PCR、酶切等技术获得oriP不同的组合片段，插入到带有CAT报告基因的载体pCAT3-Promoter中，构建出一系列携带oriP不同功能片段的质粒，并瞬时转染EB病毒原型细胞株B95-8，培养48小时后，通过比较CAT的表达水平，得出在EB病毒基因组中位于7，394bp～8，041bp之间的FR片段对转录的增强作用最好，相当于oriP全序列的4.8倍。 3．重组腺病毒体外杀伤EBNA1阳性细胞的实验研究： 利用FR片段和SV40启动子控制腺病毒复制必需基因的重组5型腺病毒（一种含有E3区，命名为Q2E3，另一种缺失E3区，命名为Q2ΔE3）和野生型腺病毒（WAd），用MTT细胞增殖检测法检测病毒对EBNA1阳性的淋巴瘤细胞及CNEZ/E BNAI细胞的杀伤作用，以EBNAI阴性细胞作为对照，结果显示:（1） QZE3和QZ砚3病毒对EBNAI阳性的淋巴瘤细胞均有明显的杀伤作用，当MOI一1，000时，EBNAI阳性细胞生存率为23%一61%;而EBNAI阴性细胞生存率高达90%一98%。（2）QZE3与QZ此3对淋巴瘤细胞的杀伤效应基本一致（P>0.05）。（3） wAd与QZE3和QZ此3比较，wAd对细胞没有选择性杀伤作用，当Mol=一，000时，对EBNAI阳性和阴性淋巴瘤细胞均有明显的杀伤作用，细胞生存率一90，0一500，0。（4）QZ此3病毒对eNEZ/EBNAI细胞产生很强的杀伤效应，当病毒感染指数Mol=l时，cNEZ/E BNAI细胞生存率为21%，cNE:细胞生存率为37%，无关正常细胞MRc一5的生存率为94%（P<0.05）。结果证明qE3和q此3病毒对EBNAI阳性细胞有特异性杀伤作用。