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背景:肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率有逐年增加的趋势。目前肺癌的治疗是以综合治疗为主,化学治疗在肺癌治疗中有着重要地位。顺铂(DDP)是肺癌治疗的常用化疗药物,然而,由于耐药的发生,常常导致肺癌化疗的失败,并限制了铂类药物的广泛应用。重组人血管内皮抑制素(rh-endo statin)的作用机制在于抑制肿瘤新生血管形成,阻断肿瘤细胞的营养供应,重组人血管内皮抑制素毒副作用少,安全性好,与化疗药物联合可提高化疗疗效,但其化疗增效的机制目前尚不清楚,单纯应用重组人血管内皮抑制素抑制肿瘤血管形成的理论很难解释化疗增效的机制。本研究主要探讨重组人血管内皮抑制素能否逆转A549/DDP细胞顺铂耐药性及其机制。目的:探讨重组人血管内皮抑制素(rh-Endostatin,YH一16)对A549/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法:本实验采用人肺腺癌细胞株A549及其顺铂耐药细胞株A549/DDP作为研究对象,以顺铂与重组人血管内皮抑制素两者联合及两者分别单独给药的方式,分别作用于人肺癌细胞株A549及耐药细胞株A549/DDP,作用时间72小时,观察不同给药方式造成的同株细胞之间耐药性的不同及不同株细胞间耐药性的差别。采用MTT法检测重组人血管内皮抑制素对肺腺癌细胞株A549及耐药株A549/DDP的细胞生长抑制作用,确定重组人血管内皮抑制素无细胞毒浓度,并检测此浓度重组人血管内皮抑制素能否逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。用流式细胞仪测定重组人血管内皮抑制素单药组、顺铂单药组、及重组人血管内皮抑制素联合顺铂组分别作用于A549/DDP细胞后的细胞凋亡率。采用western blot法检测重组人血管内皮抑制素单药组、顺铂单药组、及重组人血管内皮抑制素联合顺铂组分别作用于A549/DDP细胞后的耐药蛋白表达情况,研究重组人血管内皮抑制素逆转A549/DDP细胞株顺铂耐药性的可能机制,同时设立A549细胞对照组、A549/DDP细胞对照组,并检测两组对照组的耐药蛋白表达情况,检测的耐药蛋白包括:P糖蛋白(P-gp)及拓扑异构酶Ⅱ(TOPO-Ⅱ)。结果:1.MTT法结果显示:浓度为400ug/ml的重组人血管内皮抑制素作用72h对A549及A549/DDP细胞均无细胞毒性。DDP对A549细胞半数抑制浓度(IC50)为0.79±0.05ug/ml,对A549/DDP细胞的IC50为13.2±1.1ug/ml, A549/DDP对DDP的耐药指数为16.7。无细胞毒浓度重组人血管内皮抑制素与DDP联合用药时,A549/DDP细胞的IC50降为2.57±0.05ug/ml,逆转倍数(RF)为5.14,相对逆转率(RRR%)为85.6%,说明重组人血管内皮抑制素增强了DDP对A549/DDP细胞的杀伤作用,具有逆转A549/DDP细胞耐药的作用。2.流式细胞仪结果:重组人血管内皮抑制素单药组细胞凋亡率为2.01%,顺铂单药组为13.47%,重组人血管内皮抑制素联合顺铂组为29.26%, A549/DDP细胞对照组为0.99%。3.western blot结果显示:A549/DDP细胞内的P-gp、TOPO-Ⅱ蛋白表达量均较A549细胞高,重组人血管内皮抑制素联合DDP组处理后的A549/DDP细胞的P-gp、TOPO-Ⅱ蛋白表达量均有明显下降,各组间比较P值均小于0.05,有统计学意义。结论:重组人血管内皮抑制素能部分逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,其逆转机制可能与A549/DDP细胞内P-gp和TOPO-Ⅱ的蛋白表达量降低相关。