实验一 不同剂量的姜黄素对人富颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤生长及淋巴转移的影响目的：观察不同剂量的姜黄素对人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,以及对人宫颈癌裸鼠移植瘤淋巴管生成及淋巴道转移可能的影响,从而探讨姜黄素的体内抗肿瘤机制。方法：通过建立裸鼠移植瘤模型,将达到成瘤标准的动物模型随机分为CMC-Na对照组(0.5%)、顺铂组(3mg/kg·d-3)和姜黄素组(50mg/kg·d-1、100mg/kg·d-1、200mg/kg·d-1)。 CMC-Na对照组和姜黄素各组每日灌胃给药15天,共计15次；顺铂组腹腔注射给药,每3天一次,共5次。给药期间定期测量裸鼠的体重、移植瘤长、短径,计算移植瘤的体积、抑瘤率,制作移植瘤的生长曲线。所有给药结束后,停药24 h处死裸鼠,取出每只裸鼠体内移植瘤组织分为两部分,一部分用于HE染色法观察移植瘤组织形态学变化以及免疫组织化学法检测移植瘤组织中MIF蛋白和VEGF-C蛋白表达情况。另一部分应用RealTime-PCR法检瘤组织中MIF mRNA和VEGF-C mRNA表达水平。结果：1.姜黄素各剂量组的移植瘤体积与CMC-Na对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。姜黄素(50mg/kg·d-1、100mg/kg·d-1、200mg/kg·d-1)组抑瘤率分别为44.3%、40.1%和33.3%；2.HE染色法显示CMC-Na对照组：瘤团间可见坏死灶(10-20%)形成；姜黄素50mg/kg·d-1组瘤团间可见坏死灶(20-30%)形成；姜黄素100mg/kg·d-1组：瘤团间可见坏死灶(40-50%)形成；姜黄素200mg/kg·d-1组：瘤团间可见坏死灶(50-60%)形成；顺铂3mg/kg·d-3组：瘤团间可见坏死灶(50-60%)形成。3.免疫组化统计结果显示：姜黄素各组(50mg/kg·d-1、100mg/kg·d-1、200mg/kg·d-1)以及顺铂3mg/kg·d-3组宫颈癌细胞VEGF-C、MIF蛋白的IOD值与CMC-Na组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4. RT-PCR结果显示姜黄素各组(50mg/kg·d-1、100mg/kg·d-1、200mg/kg·d-1)以及顺铂3mg/kg·d-3组裸鼠宫颈癌组织MIF, VEGF-C mRNA的相对表达量较与对照组显著减少。结论：Curcumin能够抑制人宫颈癌CaSki细胞移植瘤生长,具有浓度依赖性。通过下调移植瘤组织中MIF、VEGF-C的表达,诱导移植瘤组织中的肿瘤细胞发生凋亡,从而可能抑制宫颈癌的淋巴管生成与转移。实验二姜黄素联合顺铂对人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤生长及淋巴转移的影响目的：讨论姜黄素联合化疗药顺铂在裸鼠体内的抗宫颈癌作用及其对淋巴转移可能的影响。方法：建立移植瘤模型,成瘤将荷瘤鼠随机分成4组：生理盐水对照组(10ml/kg·d-1)、姜黄素组(100mg/kg·d-1)、顺铂组(100mg/kg·d-3)混合组(顺铂3mg/kg·d-3+姜黄素100mg/kg·d-1),给药期间定期测量裸鼠体重、移植瘤长、短径,计算移植瘤体积,进而计算抑瘤率,制作肿瘤生长曲线。完成全部给药后,停药24 h处死裸鼠。取出每只裸鼠体内的移植瘤组织分为两部分,一部分用于HE染色法观察移植瘤组织形态学变化。另一部分应用应用实时荧光定量RT-PCR法检测植瘤组织MIF mRNA及VEGF-CmRNA的表达。结果：1.治疗组裸鼠肿瘤体积增长相对缓慢,与对照组相比差异有明显统计学意义(P<0.01)；姜黄素组抑瘤率为40.8%；顺铂组抑瘤率为53.3%；联合用药组抑瘤率为60.0%。姜黄素干预组的移植瘤瘤重与生理盐水对照组比较,其差异有统计学意义(P<0.05)。顺铂干预组及联合用药干预组瘤重明显小于对照组(P<0.01)。2.HE染色结果：各治疗组的肿瘤组织的坏死区域均有增大,以联合用药组坏死区域增大最为明显。生理盐水对照组：瘤团间可见坏死灶(5-10%)形成。姜黄素组：瘤团间可见坏死灶(30-40%)形成。顺铂组：瘤团间可见坏死灶(40-50%)形成。联合用药组：瘤团间可见坏死灶(50-60%)形成。3.管家基因的溶解曲线目的基因VEGF-C、MIF的溶解曲线显示与对照组相比,治疗组的MIF mRNA和VEGF-C mRNA表达的表达量显著下降；其中联合组MIF mRNA、VEGF-C mRNA的表达量最低。Spear-man相关性分析结果：移植瘤组织中MIF mRNA与VEGF-C mRNA之间呈现正相关(r=0.815,P=0.001),即随着MIF mRNA的表达增强,VEGF-C mRNA的表达也增强。结论：Curcumin联合Cisplatin使用能够显著抑制人宫颈癌Caski细胞裸鼠移植瘤的生长,通过下调MIF、VEGF-C的表达,进而可能抑制宫颈癌淋巴转移。