目的:构建携带PPARγ₂基因的腺病毒载体,为进一步研究PPARγ₂基因的功能,为阐明HBV感染导致肝癌的机制研究建立基础。方法:本课题采用PCR技术从pcDNA3质粒中扩增小鼠PPARγ₂基因,将PPARγ₂基因亚克隆至质粒穿梭载体pAdTrack- CMV中,同时与pAdEasy-1共转染293细胞,确定转染率,并转化到肝脏L02细胞表达。第一部分:以小鼠PPARγ₂基因质粒（PPARγ₂-pcDNA3）为材料,通过PCR方法扩增小鼠PPARγ₂基因,获得目的基因PPARγ₂,分别用Sal I和Xho I酶切PPARγ₂基因片段和pAdTrack-CMV,用T4DNA Ligase（连接酶）连接,将PPARγ₂基因片段亚克隆到pAdTrack- PPARγ₂-CMV中,构建腺病毒（adenovirus）穿梭质粒载体。正确重组的pAd-track- PPARγ₂,用PmeI线性化后与pAd Easy-1在BJ5183中同源重组,酶切得到一条23 kb左右的大片段和一条约4.5kb的特征性小片段,表明重组腺病毒质粒构建成功。结果:经PCR扩增的PPARγ₂片段克隆到腺病毒载体中,获得目的基因的测序结果与GENEBANK报道的序列一致（pubmed RID: 1144300 157-17643-133739705 380BLASTQ1）。正确重组的pAd-track- PPARγ₂用PmeI线性化后与pAd Easy-1在BJ5183中同源重组,PCR产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳,以pAd Easy-1为对照,重组腺病毒质粒酶切可见一条23 kb左右的大片段和一条约4.5kb的特征性小片段,表明重组腺病毒质粒构建成功。第二部分:重组腺病毒的包装、鉴定及表达,用脂质体（lipid body）转染法（infection protocol）,将重组腺病毒pAdTrack- PPARγ₂-CMV和pAdEasy-1共转染HEK293细胞,包装成pAdEasy- PPARγ₂腺病毒,确定转染效率。检测培养上清液病毒中PPARγ₂的存在后,将重组腺病毒基因转导到L02细胞中,经RT-PCR检测和Western blotting蛋白质表达,感染的重组PPARγ₂基因在L02细胞中能较高的稳定表达。结果:RT-PCR检测结果显示,腺病毒Ad- PPARγ₂PCR产物约为470bp;用抗PPARγ₂单克隆抗体做western blotting为阳性,感染的重组腺病毒载体在L02细胞中PPARγ₂有较高的稳定表达。结论:本实验成功构建携带小鼠PPARγ₂基因的腺病毒载体,为进一步研究PPARγ₂基因的功能,阐明PPARγ₂对肝癌的作用机制奠定了基础。