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目的:通过在体实验观察小柴胡汤(xiaochaihutang,XCHT)对硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)致大鼠A型肝性脑病(acute hepatic encephalopathy,AHE)的治疗作用以及离体实验观察小柴胡汤含药血清对高氨致星形胶质细胞(astrocytes,AS)水肿的干预作用,探讨转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,NRF2)抗氧化损伤信号通路在其中的作用。方法:在体实验,采用50只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、小柴汤低、中、高剂量组(XCHT 1.0,2.0,4.0 g/kg)。除空白对照组,余组大鼠给予300 mg/kg TAA腹腔注射3天制备A型肝性脑病大鼠模型,第4天各组依次灌胃等量双蒸水及不同剂量小柴胡汤2周。末次给药后24 h观察大鼠行为学并取材,首先通过谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)及肝脏病理切片对大鼠肝损伤程度进行测定,随后测定大鼠血氨水平、脑含水量、脑皮质中谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)。此外,通过实时荧光定量PCR(Realtime PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测了NRF2信号通路相关基因及蛋白水平,包括NRF2、KEAP1、HO-1、NQO1、GCLC、GCLM,也检测了胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和水通道蛋白4(aquaporins 4,AQP4)的mRNA及蛋白表达。为探讨小柴胡汤是否对A型肝性脑病相关脑水肿有直接干预作用,我们进行了离体实验。通过镜下直接观察、免疫荧光、Real-time PCR和Western Blot观察了小柴胡汤含药血清在高氨环境下对正常和NRF2 siRNA转染后原代脑皮质星形胶质细胞的保护作用,并探讨其机制,进一步确定小柴胡汤对星形胶质细胞水肿的直接干预作用,以及其干预作用是否通过激活NRF2信号通路。结果:1)在体实验发现,硫代乙酰胺成功制备大鼠A型肝性脑病模型,大鼠脑功能评分显著升高,发生嗜睡及共济失调等脑病症状,同时其自主活动减少。同时模型组大鼠肝脏受损、脑含水量增加、体内氨水平(血氨,脑内氨)升高,脑皮质丙二醛含量升高,总超氧化物歧化酶水平降低。经过小柴胡汤给药处理后,大鼠脑功能评分降低,自主活动增加,体内血氨水平升高,并且组织内丙二醛水平降低,总超氧化物歧化酶水平增加。机制研究发现,模型组NRF2及其信号通路的HO-1、NQO1、GCLC及GCLM的基因和蛋白表达降低;此外GFAF表达降低,AQP4表达升高。而小柴胡汤处理后,NRF2核转移激活增加,其下游基因和蛋白表达增加,GFAP表达增加,AQP4表达降低。2)离体实验中,用5 mM氨处理的原代细胞显示其体积及折光率显著增加,免疫荧光结果显示细胞中AQP4表达升高;小柴胡汤含药血清干预后,细胞体积和折光率显著下降,AQP4表达降低。机制分析结果发现,氨处理的原代星形胶质细胞NRF2、HO-1、NQO1、GCLC、GCLM的基因和蛋白表达降低,而小柴胡汤含药血清增加NRF2的核转移激活,并增加下游基因和蛋白表达。同时实验发现,NRF2-siRNA处理的星形胶质细胞中,小柴胡汤对氨诱导的肿胀星形胶质细胞的干预作用显著减弱。结论:1)小柴胡汤对硫代乙酰胺致大鼠A型肝性脑病具有治疗作用;2)小柴胡汤治疗硫代乙酰胺致A型肝性脑病的机制与促进脑皮质星形胶质细胞NRF2的核转移的激活及其下游抗氧化损伤信号通路,抑制星形胶质细胞水肿有关。